抗牛PrP多肽單克隆抗體的制備及其在牛PrP檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、可傳播性海綿樣腦病(Transmissible spongiform encephalopathies,TSE),又稱朊病毒病(Prion diseases),是一類神經(jīng)系統(tǒng)退行性致死性疾病,該病的致病因子PrP<'Sc>不同于其它微生物,它由主要存在于神經(jīng)細(xì)胞表面的朊蛋白PrP<'c>構(gòu)象改變所致,僅由蛋白質(zhì)組成,對(duì)蛋白酶K(PK)具有抗性,主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)沉積,導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞空泡樣變,宿主出現(xiàn)一系列臨床癥狀,如共濟(jì)失調(diào)、癡呆等.Pr

2、P<'c>構(gòu)象的改變是致病的根本原因,PrP<'c>二級(jí)結(jié)構(gòu)以α螺旋為主,PrP<'Sc>二級(jí)結(jié)構(gòu)β折疊為主.人類TSE主要有克雅氏癥(Creutzfeldt-Jakob disease,CJD),新型變異CJD(new variant CJD,nvCJD),GSS綜合癥(Gerstamann Straussler syndrome,GSS)、致死性家族性失眠癥(Fetal familial insomnia,FFI),動(dòng)物的TSE主要

3、有牛海綿樣腦病(Bovine spongiform encephalopathy,BSE),羊瘙癢病(Scrapie of goat or sheep)等.該病可通過多種途徑傳播,如消化道、醫(yī)源性途徑(器官移植、神經(jīng)外科、血液等)等,潛伏期很長,一般5~15年,一旦發(fā)病,100﹪的感染者在數(shù)月內(nèi)死亡.目前TSE的發(fā)病機(jī)理還不清楚,也無有效的治療方法,特異性診斷主要依靠腦組織中PrP<'Sc>檢測(cè),檢測(cè)方法主要是免疫組化(Immunohi

4、stochemistry,IHC)、Western blot、ELISA等免疫學(xué)方法.為了研究TSE的致病機(jī)理、建立特異、靈敏的PrP<'Sc>檢測(cè)方法.我們以外周血中提取的牛(Bovine,Bo)、倉鼠(Hamster,Ha)、人(Human,Hu)基因組DNA為模板,PCR擴(kuò)增并克隆BoPrP(25~242)、HaPrP(23~231)、HuPrP(23~231)基因;并對(duì)其序列進(jìn)行了對(duì)比研究;以pGEMCS為表達(dá)載體,在M15大腸