山莨菪堿對心臟驟停大鼠及缺氧-復(fù)氧心肌細(xì)胞影響的研究.pdf

1、有研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)蘇中增加腎上腺素的用量，盡管可以增加心腦灌注壓和血液灌流量，但同時可能對心肌和腦組織造成損害，終導(dǎo)致復(fù)蘇成功率下降。而山莨菪堿(anisodamine，Ani)具有增加冠脈血流量、改善微循環(huán)、降低血小板聚集、抑制血栓形成、減輕心肌及腦組織的缺血/再灌注損傷等作用。心肺復(fù)蘇早期應(yīng)用Ani干預(yù)可能會改善組織的灌注，改善復(fù)蘇后心肌及腦組織的功能，減輕腎上腺素的負(fù)作用，以期提高復(fù)蘇成功率和改善預(yù)后，本研究對山茛菪堿在心肺復(fù)蘇中的作

2、用進(jìn)行實驗研究以探討其對缺血心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。
　　 目的在建立一個標(biāo)準(zhǔn)化大鼠心臟驟停及心肺復(fù)蘇模型基礎(chǔ)上，應(yīng)用盲法給藥，觀察山莨菪堿對心臟驟停大鼠心肌及腦組織代謝的影響，并進(jìn)一步從細(xì)胞凋亡觀察山莨菪堿對缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞的作用。
　　 方法實驗共4部分：第一部分，成年Sprague-Dawley(SD)大鼠30只，隨機(jī)分成兩組，生理鹽水對照組(n=15)，腎上腺素組(n=15)。采用交流電生理刺激儀經(jīng)食道調(diào)搏誘發(fā)心臟

3、驟停模型，5min后開始心肺復(fù)蘇，應(yīng)用自行設(shè)計大鼠心臟胸外按壓機(jī)進(jìn)行心臟按壓。觀察心臟驟停類型分布，誘發(fā)成功時間，自主循環(huán)恢復(fù)率及復(fù)蘇成功率，試驗后尸體解剖觀察食道及心臟有無灼傷，內(nèi)臟有無破裂。第二部分，模型操作同第一部分，65只SD大鼠隨機(jī)分為5組，生理組(n=5)、生理鹽水組(n=15)、腎上腺素組(n=15)、腎上腺素聯(lián)合山莨菪堿組(n=15)、山茛菪堿組(n=15)，采用盲法給藥，調(diào)搏前靜脈注射2-[18F]氟-2-脫氧-D-葡

4、萄糖(FDG)0.6ml。復(fù)蘇后30min內(nèi)留取部分實驗大鼠心臟及腦組織進(jìn)行放射性計數(shù)，留取靜脈血送檢血漿心房利尿鈉肽。第三部分，在第二部分基礎(chǔ)上留取存活大鼠腦及心肌組織，檢測細(xì)胞晚期凋亡及電鏡觀察線粒體損傷情況。第四部份，細(xì)胞培養(yǎng)研究：取乳鼠心室肌細(xì)胞培養(yǎng)傳一代后分成五組，正常生理對照組、缺氧/復(fù)氧組、腎上腺素組、腎上腺素聯(lián)合山茛菪堿組、山莨菪堿組，缺氧2h/復(fù)氧12h，每組至少3瓶細(xì)胞。采用流式細(xì)胞儀檢測缺氧/復(fù)氧后的細(xì)胞凋亡情況，

5、同時用TUNEL法檢測晚期細(xì)胞凋亡。RT-PCR法檢測心肌細(xì)胞Ml-3受體亞型的表達(dá)。
　　 結(jié)果1.所有大鼠均誘發(fā)心臟驟停成功，其中心室顫動10例(33.3％)，無脈搏電活動15例(50.0％)，心電靜止5例(16.7％)，誘發(fā)時間60～150s；自主循環(huán)恢復(fù)率對照組為6.7％，腎上腺素組為46.6％；復(fù)蘇成功率對照組為0，腎上腺素組為33.3％。食道粘膜存在輕度灼傷，心臟未見灼傷，食道及腹腔內(nèi)臟未見破裂。2.腎上腺素聯(lián)合山莨

6、菪堿組復(fù)蘇成功率為70％，高于其它各組，其復(fù)蘇成功率分別為腎上腺素組33.3％、生理鹽水組0、山莨菪堿組26.7％(P<0.01)。腎上腺素復(fù)蘇成功的心臟和腦組織放射性計數(shù)均明顯低于腎上腺素聯(lián)合山莨菪堿組，分別為心臟(25.71±2.83 vs38.3±7.2，P<0.05)，腦組織(16.06±2.93 vs31.02±2.72，P<0.05)。腎上腺素聯(lián)合山莨菪堿組及單純山莨菪堿組復(fù)蘇成功大鼠血漿心房利尿鈉肽水平明顯低于腎上腺素組，

7、分別為(1963.1±1096.7，483.6±205.9vs4417.6±2235.9，P<0.05)，但均高于生理組(238.3±190.0，P<0.05)。3.腎上腺素存活組的腦組織凋亡細(xì)胞百分?jǐn)?shù)明顯多于正常生理對照組及腎上腺素聯(lián)合山莨菪堿組(8.85±1.2 vs0.87±0.25，4.25±1.05，P<0.01)，腎上腺素存活組的心肌組織凋亡細(xì)胞百分?jǐn)?shù)明顯多于正常生理對照組及腎上腺素聯(lián)合山莨菪堿組(8.15±1.60 vs2

8、.13±0.65，4.07±1.55，P<0.01)。腎上腺素聯(lián)合山莨菪堿組復(fù)蘇成功大鼠腦及心肌線粒體損傷明顯較腎上腺素組輕。4.細(xì)胞培養(yǎng)：缺氧2h/復(fù)氧12h，腎上腺素組早期凋亡細(xì)胞明顯高于其他各組(P<0.01)，山莨菪堿組及腎上腺素聯(lián)合山莨菪堿組早期凋亡細(xì)胞低于缺氧/復(fù)氧組。腎上腺素組晚期凋亡細(xì)胞明顯高于山莨菪堿組(P<0.01)，略低于缺氧/復(fù)氧組及腎上腺素聯(lián)合山莨菪堿組，但無統(tǒng)計學(xué)意義。RT-PCR檢測出心肌細(xì)胞M2受體亞型表