山莨菪堿對心臟驟停大鼠復(fù)蘇及內(nèi)皮損傷干預(yù)的研究.pdf

1、目的：觀察山莨菪堿（anisodamine，Ani）對心臟驟停大鼠復(fù)蘇時自主循環(huán)恢復(fù)和復(fù)蘇成功率的影響，及對心臟驟停大鼠內(nèi)皮損傷的干預(yù)作用。觀察Ani對缺氧/復(fù)氧損傷內(nèi)皮細(xì)胞的影響，探討其是否具有對內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用及其可能機制，為心肺復(fù)蘇中應(yīng)用Ani提供實驗及可能的理論依據(jù)。
　　 方法：本研究共四部分：第一部分和第二部分觀察Ani對心臟停搏后自主循環(huán)恢復(fù)和復(fù)蘇成功率的影響及Ani對心臟驟停大鼠內(nèi)皮損傷的干預(yù)作用。采用45只S

2、D成年大鼠隨機分為3組：對照組、腎上腺素組和腎上腺素合用Ani組。采用經(jīng)食道心臟起搏誘發(fā)心室顫動或心室靜止，使用電動機械胸外心臟按壓機進(jìn)行胸外按壓，采用盲法給藥對比不同組間自主循環(huán)恢復(fù)及復(fù)蘇成功率。通過透射電鏡觀察大鼠心臟驟停后腦和心肌血管內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化，采用放射免疫法測定血清內(nèi)皮素和TNF-α水平的變化，采用免疫熒光染色法觀察心室肌血管內(nèi)皮Bcl-2蛋白表達(dá)的變化。第三部分和第四部分研究Ani對缺氧/復(fù)氧損傷內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及M受體

3、的影響。實驗分五組：對照組、生理鹽水組、腎上腺素組、Ani組、腎上腺素合用Ani組。采用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞缺氧/復(fù)氧方法觀察內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的變化，采用Annexin-V-FITC流式細(xì)胞術(shù)和TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡，采用放射免疫法測定細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)皮素和NO水平，采用RT-PcR法檢測血管內(nèi)皮細(xì)胞Bcl-2 mRNA和M受體mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：第一部分：腎上腺素合用Ani組自主循環(huán)恢復(fù)和復(fù)蘇成功率、3h存活率均高于腎上腺素

4、組。自主循環(huán)恢復(fù)即刻腎上腺素組平均動脈壓高于腎上腺素合用Ani組，自主循環(huán)恢復(fù)后5 min開始至自主循環(huán)恢復(fù)后30 min，腎上腺素組明顯低于腎上腺素合用Ani組。第二部分：透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)腎上腺素組心肌和腦皮層血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度較腎上腺素合用Ani組嚴(yán)重。腎上腺素合用Ani組Bcl-2蛋白表達(dá)強于腎上腺素組。心肺復(fù)蘇后血清內(nèi)皮素和TNF-α水平均較復(fù)蘇前升高，自主循環(huán)恢復(fù)5min和60min，腎上腺素合用Ani組內(nèi)皮素水平較腎上腺素

5、組升高明顯，自主循環(huán)恢復(fù)60min，腎上腺素組TNF-α水平較腎上腺素合用Ani組升高。第三部分，復(fù)氧12h后腎上腺素組、腎上腺素合用Ani組及Ani組的凋亡率均較生理鹽水組降低，腎上腺素組和Ani組比較未見統(tǒng)計學(xué)差異，腎上腺素合用Ani組凋亡率較腎上腺素組降低。復(fù)氧12h和24h后腎上腺素組、腎上腺素合Ani組、Ani組的Bcl-2 mRNA表達(dá)水平較生理鹽水組和對照組升高，腎上腺素合用Ani組Bcl-2 mRNA表達(dá)水平升高最顯著。

6、復(fù)氧12h和24h后腎上腺素組、腎上腺素合用Ani組、Ani組的內(nèi)皮素水平較生理鹽水組降低，但均高于對照組，復(fù)氧12h腎上腺素合用Ani組內(nèi)皮素水平較腎上腺素組降低，復(fù)氧24h兩組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。復(fù)氧12h和24h后腎上腺素組、腎上腺素合用Ani組、Ani組的NO水平較生理鹽水組升高，但均低于對照組，復(fù)氧12h腎上腺素合用Ani組NO水平較腎上腺素組升高，復(fù)氧24h兩組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。第四部分：人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞上有M2受體mRNA表