內(nèi)皮抑素對人結(jié)腸癌細胞SW620生長影響的體外研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、結(jié)直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一,占消化道惡性腫瘤的第二位。結(jié)直腸癌治療失敗的主要原因是癌細胞發(fā)生了血行或淋巴轉(zhuǎn)移。研究顯示,結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移不僅與癌細胞的侵襲能力有關(guān),還與腫瘤內(nèi)血管、淋巴管的新生密切相關(guān)。大量資料表明,在人類結(jié)直腸癌中存在著血管、淋巴管的新生,而且血管、淋巴管的密度與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后相關(guān)。抑制血管新生可以減少腫瘤的血供,誘導(dǎo)腫瘤細胞的凋亡,減少轉(zhuǎn)移的機率;抑制淋巴管新生可以降低淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率,改善預(yù)后。目前研制和開發(fā)抗

2、新生血管形成藥物一直是國內(nèi)外的研究熱點,其中尤其內(nèi)皮抑素引人注目。
   內(nèi)皮抑素(endostatin,ES),是近年來發(fā)現(xiàn)的一種特異性血管生成抑制因子,它能在細胞水平抑制內(nèi)皮細胞的增殖、移行,并導(dǎo)致內(nèi)皮細胞細胞周期的阻滯,發(fā)生凋亡。動物實驗也已證實內(nèi)皮抑素具有高效抑制腫瘤血管生成,進而抑制腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的作用,且治療后不易復(fù)發(fā),反復(fù)應(yīng)用并不產(chǎn)生耐藥性,毒副作用極低,對各期腫瘤均有效。最近研究發(fā)現(xiàn),內(nèi)皮抑素除了抗血管活性

3、外,對某些腫瘤細胞系如人舌鱗狀細胞癌、頭頸鱗狀細胞癌、宮頸癌細胞、喉鱗狀細胞癌細胞等均有一定的生長抑制作用。但有關(guān)內(nèi)皮抑素對結(jié)腸癌的影響及作用機制的研究目前少有報道。內(nèi)皮抑素在淋巴管形成過程中的作用及機制也尚不清楚。
   血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)家族中的VEGF-A是血管生成的重要因子;而VEGF-C和VEGF-D則淋巴管新生的重要調(diào)控因子?,F(xiàn)已證實內(nèi)皮抑素可以通過阻斷VEGF、bFGF等誘發(fā)的細胞遷移過程中的多個環(huán)節(jié)來抑

4、制血管內(nèi)皮的遷移,從而實現(xiàn)抑制血管生成的作用。但內(nèi)皮抑素能否調(diào)控結(jié)直腸癌細胞VEGF-A、VEGF-C和VEGF-D的表達尚未見報道。
   另外,肝細胞生長因子(Hepatocyte growth factor,HGF),它對多種細胞具有促有絲分裂、促移動、促形態(tài)發(fā)生的活性,所以又稱離散因子(scatter factor,SF)。HGF發(fā)揮其各種生物學(xué)作用,主要通過其受體c-Met實現(xiàn),已有研究證實HGF在腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移

5、過程中起重要作用,而且在血管形成中也發(fā)揮重要作用。最近有研究顯示,HGF還是淋巴管生成的促進因子。因此研究內(nèi)皮抑素能否調(diào)控結(jié)直腸癌細胞HGF和c-Met的表達有助于探討其作用機制。
   本實驗采用形態(tài)與機能相結(jié)合的方法系統(tǒng)檢測內(nèi)皮抑素對人結(jié)腸癌細胞SW620的增殖、移行行為以及對SW620的VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D、HGF和c-Met表達的影響,以期為結(jié)直腸癌抗血管生成尋找治療新靶點。
   方法:

6、r>   1應(yīng)用MTT法分析內(nèi)皮抑素對細胞增殖的作用。
   2采用流式細胞術(shù)檢測內(nèi)皮抑素對細胞周期的影響。
   3基底膜重建實驗觀察內(nèi)皮抑素對細胞移行的影響。
   4應(yīng)用Western blotting檢測細胞加入內(nèi)皮抑素前后VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D、HGF和c-Met表達水平的變化。
   結(jié)果:
   1內(nèi)皮抑素能抑制SW620增殖,其抑制增殖作用呈質(zhì)量濃度依賴關(guān)系,但

7、隨著內(nèi)皮抑素濃度的增高對細胞增殖抑制作用增長緩慢,在以最大實驗作用濃度20ug/ml作用48h后其抑制率也僅為36.75%。
   2流式細胞術(shù)結(jié)果顯示,內(nèi)皮抑素對SW620細胞周期雖有一定程度的影響但效果并不太顯著。與對照組相比,內(nèi)皮抑素組中的G0/G1期細胞增加1.5%,G2/M期細胞減少2.3%,S期細胞增加0.9%,增殖指數(shù)由對照組的53.7%降至52.3%,凋亡率改變不大,由對照組的0.34%增至0.57%。
 

8、  3基底膜重建實驗顯示,內(nèi)皮抑素能明顯抑制SW620細胞移行并且呈質(zhì)量濃度依賴關(guān)系,在最小實驗濃度0.1ug/ml作用48h后其對移行抑制率已達22.66%,在10ug/ml時其抑制率更是達到94.14%。
   4 Western Blotting結(jié)果顯示,加入內(nèi)皮抑素后下調(diào)了SW620細胞的VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D、HGF和c-Met的表達水平。
   結(jié)論:
   內(nèi)皮抑素可以抑制人結(jié)腸

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