內(nèi)皮抑素對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620生長影響的體外研究.pdf

1、結(jié)直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，占消化道惡性腫瘤的第二位。結(jié)直腸癌治療失敗的主要原因是癌細(xì)胞發(fā)生了血行或淋巴轉(zhuǎn)移。研究顯示，結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移不僅與癌細(xì)胞的侵襲能力有關(guān)，還與腫瘤內(nèi)血管、淋巴管的新生密切相關(guān)。大量資料表明，在人類結(jié)直腸癌中存在著血管、淋巴管的新生，而且血管、淋巴管的密度與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后相關(guān)。抑制血管新生可以減少腫瘤的血供，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，減少轉(zhuǎn)移的機(jī)率；抑制淋巴管新生可以降低淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率，改善預(yù)后。目前研制和開發(fā)抗

2、新生血管形成藥物一直是國內(nèi)外的研究熱點(diǎn)，其中尤其內(nèi)皮抑素引人注目。
　　 內(nèi)皮抑素（endostatin，ES），是近年來發(fā)現(xiàn)的一種特異性血管生成抑制因子，它能在細(xì)胞水平抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、移行，并導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞周期的阻滯，發(fā)生凋亡。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也已證實(shí)內(nèi)皮抑素具有高效抑制腫瘤血管生成，進(jìn)而抑制腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的作用，且治療后不易復(fù)發(fā)，反復(fù)應(yīng)用并不產(chǎn)生耐藥性，毒副作用極低，對(duì)各期腫瘤均有效。最近研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮抑素除了抗血管活性

3、外，對(duì)某些腫瘤細(xì)胞系如人舌鱗狀細(xì)胞癌、頭頸鱗狀細(xì)胞癌、宮頸癌細(xì)胞、喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞等均有一定的生長抑制作用。但有關(guān)內(nèi)皮抑素對(duì)結(jié)腸癌的影響及作用機(jī)制的研究目前少有報(bào)道。內(nèi)皮抑素在淋巴管形成過程中的作用及機(jī)制也尚不清楚。
　　 血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）家族中的VEGF-A是血管生成的重要因子；而VEGF-C和VEGF-D則淋巴管新生的重要調(diào)控因子?，F(xiàn)已證實(shí)內(nèi)皮抑素可以通過阻斷VEGF、bFGF等誘發(fā)的細(xì)胞遷移過程中的多個(gè)環(huán)節(jié)來抑

4、制血管內(nèi)皮的遷移，從而實(shí)現(xiàn)抑制血管生成的作用。但內(nèi)皮抑素能否調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞VEGF-A、VEGF-C和VEGF-D的表達(dá)尚未見報(bào)道。
　　 另外，肝細(xì)胞生長因子（Hepatocyte growth factor，HGF），它對(duì)多種細(xì)胞具有促有絲分裂、促移動(dòng)、促形態(tài)發(fā)生的活性，所以又稱離散因子（scatter factor，SF）。HGF發(fā)揮其各種生物學(xué)作用，主要通過其受體c-Met實(shí)現(xiàn)，已有研究證實(shí)HGF在腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移

5、過程中起重要作用，而且在血管形成中也發(fā)揮重要作用。最近有研究顯示，HGF還是淋巴管生成的促進(jìn)因子。因此研究內(nèi)皮抑素能否調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞HGF和c-Met的表達(dá)有助于探討其作用機(jī)制。
　　 本實(shí)驗(yàn)采用形態(tài)與機(jī)能相結(jié)合的方法系統(tǒng)檢測(cè)內(nèi)皮抑素對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620的增殖、移行行為以及對(duì)SW620的VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D、HGF和c-Met表達(dá)的影響，以期為結(jié)直腸癌抗血管生成尋找治療新靶點(diǎn)。
　　 方法：

6、r>　　 1應(yīng)用MTT法分析內(nèi)皮抑素對(duì)細(xì)胞增殖的作用。
　　 2采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)內(nèi)皮抑素對(duì)細(xì)胞周期的影響。
　　 3基底膜重建實(shí)驗(yàn)觀察內(nèi)皮抑素對(duì)細(xì)胞移行的影響。
　　 4應(yīng)用Western blotting檢測(cè)細(xì)胞加入內(nèi)皮抑素前后VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D、HGF和c-Met表達(dá)水平的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1內(nèi)皮抑素能抑制SW620增殖，其抑制增殖作用呈質(zhì)量濃度依賴關(guān)系，但

7、隨著內(nèi)皮抑素濃度的增高對(duì)細(xì)胞增殖抑制作用增長緩慢，在以最大實(shí)驗(yàn)作用濃度20ug/ml作用48h后其抑制率也僅為36.75％。
　　 2流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，內(nèi)皮抑素對(duì)SW620細(xì)胞周期雖有一定程度的影響但效果并不太顯著。與對(duì)照組相比，內(nèi)皮抑素組中的G0/G1期細(xì)胞增加1.5％，G2/M期細(xì)胞減少2.3％，S期細(xì)胞增加0.9％，增殖指數(shù)由對(duì)照組的53.7％降至52.3％，凋亡率改變不大，由對(duì)照組的0.34％增至0.57％。
　

8、　 3基底膜重建實(shí)驗(yàn)顯示，內(nèi)皮抑素能明顯抑制SW620細(xì)胞移行并且呈質(zhì)量濃度依賴關(guān)系，在最小實(shí)驗(yàn)濃度0.1ug/ml作用48h后其對(duì)移行抑制率已達(dá)22.66％，在10ug/ml時(shí)其抑制率更是達(dá)到94.14％。
　　 4 Western Blotting結(jié)果顯示，加入內(nèi)皮抑素后下調(diào)了SW620細(xì)胞的VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D、HGF和c-Met的表達(dá)水平。
　　 結(jié)論：
　　 內(nèi)皮抑素可以抑制人結(jié)腸