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1、目的:信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3(STAT3)是一個(gè)核轉(zhuǎn)錄因子,被證明是多個(gè)腫瘤致發(fā)生的相關(guān)信號(hào)通路的匯集點(diǎn),對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡、增殖、以及腫瘤組織新生血管生成等都具有調(diào)控作用。結(jié)直腸癌是世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,在美國(guó)40-79歲的人群中,它是第二位導(dǎo)致死亡的惡性腫瘤。RNA干擾(RNAi)技術(shù)是一種能特異的沉默轉(zhuǎn)錄后基因的機(jī)制,能有效的抑制目的mRNA的表達(dá),從而抑藥物開(kāi)發(fā)和疾病治療等研究領(lǐng)域。本論文將利用RNAi技術(shù)特異性抑制人結(jié)
2、腸癌sw620細(xì)胞中STAT3基因的表達(dá),然后對(duì)細(xì)胞水平上的抗腫瘤作用和機(jī)理進(jìn)行研究。
方法:將針對(duì)STAT3基因的干擾短發(fā)卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)克隆到pGenesil-1質(zhì)粒表達(dá)載體中,命名為p-shSTAT3。P-shSTAT3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染sw620細(xì)胞48 h后,利用RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)STAT3基因mRNA和蛋白水平上的表達(dá)情況。利用Hochest33258染色
3、對(duì)轉(zhuǎn)染p-shSTAT3后sw620細(xì)胞的凋亡情況進(jìn)行檢測(cè);利用Western blot技術(shù)對(duì)p53、Caspase3、Bax、Bcl-xL和Bcl-2等凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)。
結(jié)果:轉(zhuǎn)染p-shSTAT3質(zhì)粒能在細(xì)胞水平上有效抑制sw620細(xì)胞中STAT3基因在mRNA和蛋白水平上的表達(dá)。Hochest33258染色表明在sw620細(xì)胞中干擾掉STAT3基因的表達(dá)能顯著誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生(P<0.05),亂序?qū)φ?/p>
4、p-shSc無(wú)明顯的促凋亡作用。對(duì)作用機(jī)理進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn),在sw620細(xì)胞中干擾掉STAT3基因的表達(dá)促進(jìn)了p53、Caspase3和Bax三個(gè)凋亡誘導(dǎo)蛋白的表達(dá);同時(shí)抑制了凋亡抑制蛋白Bcl-xL和口Bcl-2的表達(dá)。
結(jié)論:利用RNA干擾技術(shù)抑制掉sw620細(xì)胞中STAT3基因的表達(dá)能有效誘導(dǎo)p53、Caspase3和Bax的表達(dá);抑制Bcl-xL和Bcl-2的表達(dá),進(jìn)而產(chǎn)生促進(jìn)sw620細(xì)胞凋亡發(fā)生的抗腫瘤作用,為結(jié)腸癌
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