AF-2364在兔體內(nèi)的藥代動力學與抗生育研究.pdf

1、目的：建立檢測兔血漿中AF-2364的高效液相色譜分析方法；以高效液相色譜法研究AF-2364在兔體內(nèi)的藥代動力學；采用靜脈和灌胃兩種不同給藥途徑研究AF-2364對兔的抗生育作用。 方法： ①建立HPLC檢測方法;高效液相色譜儀為Agilentl100系列；色譜柱選用ZORBAXECLIPSEXDB-C-18；流動相分AB兩種，流動相A：乙腈：水：三氟乙酸(5:95:0.1，V/V/V)，流動相B：乙腈：水：三氟乙酸(

2、95:5:0.1，V/V/V)；以卡馬西平為內(nèi)標，血漿經(jīng)正己烷：乙酸乙酯(1:4)萃取后，氮氣吹干，用乙腈：水：三氟乙酸(40:60:0.1，V/V/V)復溶；梯度沖洗：0-3.SminA:B=66:34,3.5-5.5minA:B=60:40,5.5-7.5minA:B=40:60：流速1ml·min-1；柱溫30℃：檢測波長302nm，參比波長：380nm；對血漿中的AF-2364進行檢測。 ②選取27只雄性日本大耳白兔，隨

3、機分成靜脈給藥組、灌胃給藥組、空白對照組，每組各9只，單獨飼養(yǎng)。靜脈給藥組和灌胃給藥組分別靜注和灌胃給以AF-236425mg/kg每周一次，連續(xù)4周；空白組靜注等容量的酒精：二甲基亞砜溶液(2:1，V/V)，每周一次，連續(xù)四周。 ③藥動學實驗：從靜脈給藥組和灌胃給藥組各隨機選取6只兔子，第一次給藥后于48h內(nèi)多點取血，用建立的HPLC方法，測定兔血漿中AF-2364的濃度。靜脈給藥和灌胃給藥后血漿藥物濃度的數(shù)據(jù)經(jīng)DAS程序處理

4、，用非房室模型估算藥動學數(shù)據(jù)。以AUC（0-∞)計算生物利用度。 ④抗生育實驗：每隔兩周各組兔子稱重，各組隨機選取3只兔子處死，取睪丸、附睪用Bouin液固定，取肝臟、腎臟用10％福爾馬林固定，睪丸電鏡標本用2.5％戊二醛固定；采用標準的組織學技術(shù)制作組織標本；光鏡標本用OLYMPUSCX31電子顯微鏡觀察，電鏡標本用同立公司H-7500透射電鏡觀察。 結(jié)果： ①AF-2364和內(nèi)標卡馬西平出峰干凈利落，峰形良好

5、，分離完全，無雜質(zhì)峰干擾，AF-2364的保留時間7.3min，內(nèi)標卡馬西平的保留時間為4.7min。AF-2364在0.125-20μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.99987)；最低檢測限為0.125μg·mL-1，平均相對回收率(104.95±3.09)％；平均絕對回收率為(53.148±1.466)％；日內(nèi)精密度RSD小于5％，日間精密度RSD小于15％，可用于AF-2364藥動學檢測。 ②靜脈和灌胃給藥后AF-

6、2364的Cmax分別為(7.669±1.69)mg·L-1和(0.526±a:0.14)mg·L-1；Tmax分別為0.1h和1h；消除迅速，t1/2β分別為(2.284±0.599)h和(5.645±1.512)h；AUC(0-t)分別為(19.611±2.185)mg·h·L-1，(1.647±0.452)mg·h·L-1，AUC(0-∞)分別為(20.411±1.803)mg·h·L-1，(2.23±0.45)mg·h·L-1；

7、AF-2364在兔體內(nèi)的絕對生物利用度F=(8.055±1.453)％，灌胃給藥吸收少。 ③睪丸病理學檢查顯示，靜脈給藥2周后大量的生精細胞脫落，生精小管中可見一些脫落的生精細胞融合成一團，生精上皮變薄，附睪管內(nèi)精子減少。靜脈給藥4周后，生精細胞脫落加劇，絕大部分生精小管失去排列規(guī)則的生精細胞，部分管腔只剩緊貼基膜的支持細胞和精原細胞，生精小管管腔明顯增大，附睪管腔內(nèi)精子消失。停藥2周后，生精上皮恢復，各級生精細胞開始出現(xiàn)，附睪

8、管內(nèi)精子開始充盈。灌胃給藥組的改變較靜脈給藥組改變輕，給藥后2周可見生精上皮變薄，附睪管內(nèi)精子減少，給藥后4周，生精細胞脫落明顯，生精小管管腔明顯增大，部分附睪管內(nèi)，精子幾乎消失；停藥2周后，生精上皮恢復，附睪管內(nèi)精子充滿管腔。 電鏡檢查顯示精子核頭部溶解，尾部中段線粒體數(shù)目減少，生精細胞之間以及與支持細胞間的連接點被破壞，間隙增大。 靜脈給藥組改變的程度比灌胃給藥組明顯，提示AF-2364的抗生育作用與血藥濃度有關(guān)。實