豬流感病毒抗體水平監(jiān)測(cè)、神經(jīng)氨酸酶基因的克隆與原核表達(dá)載體初步的構(gòu)建.pdf

1、為了解廣西豬群中豬流感病毒抗體水平，本調(diào)查主要采用血球凝集抑制(HI)試驗(yàn)和ELISA相結(jié)合的血清學(xué)方法，從廣西10個(gè)市11個(gè)規(guī)模種豬場(chǎng)(均未進(jìn)行SIV免疫)采集種公豬、后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬399份血清，從小型豬場(chǎng)和散養(yǎng)戶(hù)采集不同年齡階段豬的血清291份，進(jìn)行了H1和H3亞型豬流感病毒的抗體檢測(cè)。用HI方法和ELISA對(duì)344份進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明：HI方法檢測(cè)出陽(yáng)性為175份，陽(yáng)性率分別為50.87％(175/344)；ELISA法檢測(cè)

2、出陽(yáng)性為195份，陽(yáng)性率分別為56.68％(195/344)；HI方法與ELISA方法的符合率達(dá)到89.74％(175/195)，但兩種檢測(cè)方法檢出率差異不顯著(P>0.05)；說(shuō)明改良的HI試驗(yàn)作為檢測(cè)方法，可以用于監(jiān)測(cè)非免疫豬群的流感病毒感染情況。11個(gè)規(guī)模種豬場(chǎng)均受到不同程度的H1和H3亞型SIV感染，H1、H3和H1+H3亞型流感病毒抗體平均陽(yáng)性率為60.5％、42％和21.65％；而其它小型豬場(chǎng)和散養(yǎng)戶(hù)豬血清的H1、H3和Hl

3、+H3亞型流感病毒抗體陽(yáng)性率相對(duì)較低，別為31.31％、34.34％、7.1％。2006至2007年，本實(shí)驗(yàn)同時(shí)在全區(qū)14個(gè)市130個(gè)疑似豬流感病毒(SIV)感染的發(fā)病豬采集251份組織病料(肺、脾、淋巴結(jié))和在4個(gè)市8個(gè)豬場(chǎng)采集155份病料棉拭子，提取RNA，用核蛋白(NP)引物進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)SIV，將檢出陽(yáng)性病料，結(jié)果：在251份和155份中分別檢測(cè)出72份和11份為陽(yáng)性。由于上述豬場(chǎng)的未使用SIV疫苗的免疫，因此，這些抗體只

4、能理解是由野毒株感染產(chǎn)生的。這就表明目前，廣西豬群中普遍受H1和H3亞型SIV感染，因此我們要嚴(yán)密監(jiān)視流感病毒在豬群中的發(fā)展動(dòng)向，防止流感的大流行。 本研究同時(shí)對(duì)神經(jīng)酸酶(NA)核苷酸序列設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增NA，將擴(kuò)增獲得的NA基因克隆與PMD-18載體，并測(cè)序，然后將該基因插入PET32中構(gòu)建原核表達(dá)載體，最后將重組質(zhì)粒構(gòu)建的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞BL21，酶切鑒定后對(duì)其序列分析。結(jié)果：擴(kuò)增的SIV NA基因片段大