酶組化法和生化法在藥物安評中的效果比較及鹽酸雷諾嗪遺傳毒性研究.pdf

1、藥物毒性是導(dǎo)致藥物研發(fā)失敗的主要原因之一。為了避免在藥物開發(fā)晚期發(fā)現(xiàn)毒性導(dǎo)致的昂貴代價，盡早確定藥物潛在的毒性問題非常重要。在藥物毒性中，以肝和腎毒性最為重要。肝臟是生物轉(zhuǎn)化和解毒的主要場所，也是毒性損傷的易感靶器官之一。據(jù)報道，藥源性肝病或肝損傷在藥物不良反應(yīng)中占10％-15％。因此藥物毒性的早期發(fā)現(xiàn)對藥物研發(fā)就顯得至關(guān)重要。本課題旨在實驗研究基礎(chǔ)上，以Beagle犬作為模型，以低分量褐藻多糖硫酸酯(Low Molecular Wei

2、ght Fucoidan，LMWF)為研究對象，采用不同的檢測方法，檢測肝臟敏感指標(biāo)的變化，對毒性早期反應(yīng)進行判斷，分析藥物產(chǎn)生毒性的可能性，提高重要臟器敏感指標(biāo)預(yù)測毒性的準(zhǔn)確性。
　　 1.酶組化法和生化法在藥物安評中的效果比較
　　 目的：觀察LMWF對Beagle犬肝臟血清生化及酶組織化學(xué)的影響。方法：(1)動物分組和給藥：取健康Beagle犬16只，♀♂各半，按體重隨機分為溶媒對照組(Veh)、LMWF低(L，2

3、00 mg/kg/d)、中(M，800 mg/kg/d)、高(H，3000 mg/kg/d)劑量組，每組4只。采用灌胃給藥方式，每天上午給藥1次，連續(xù)給藥6 d后，停藥1 d。按此方式，共計給藥13 wk。(2)指標(biāo)檢測：每天進行一般癥狀觀察，每周測定體重1次；檢測第一次給藥前及末次給藥后的動物血清生化指標(biāo)；末次給藥后，取肝臟稱重，計算臟器系數(shù)；在肝臟相同位置取1cm3大小組織，放入液氮速凍，切片、染色，進行酶組織化學(xué)檢測；剩余肝臟用4

4、％中性甲醛溶液固定，石蠟包埋后切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡檢查。結(jié)果：(1)一般癥狀：LMWF各劑量組與Veh組動物于給藥前和試驗階段均未出現(xiàn)異常癥狀，動物活動狀態(tài)良好，飲食、飲水正常。(2)體重：試驗結(jié)果表明，在給藥期間，LMWF不同劑量組動物的體重與Veh組比較，未見明顯改變(P>0.05)。(3)血清生化學(xué)檢測：給藥前和給藥結(jié)束，LMWF給藥各組動物的相關(guān)血清生化指標(biāo)與Veh組比較，無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。(4)病理學(xué)檢測：各

5、給藥組動物的肝臟濕重和臟器系數(shù)與Veh組比較，未見明顯變化(P>0.05)；光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果顯示，各給藥組動物肝臟的組織形態(tài)并未發(fā)現(xiàn)明顯病變。(5)肝臟 ATPase(adenosine triphosphatase，ATPase)和SDH(Succinate dehydrogenase，SDH)無論是定性觀察還是定量分析，3000 mg/kg/d給藥酶活性下降明顯，與Veh組比較，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：LMWF給藥13

6、 wk，(1)動物一般狀況良好，其活動、飲食、飲水和體重增長正常，常規(guī)臨床檢測未見與藥物相關(guān)的異常變化。(2)酶組織化學(xué)檢測，LMWF3000 mg/kg/d給藥ATPase和SDH活性明顯減弱，說明此劑量給藥對肝臟線粒體功能有影響，同時也表明酶組化方法比生化方法敏感。
　　 2.鹽酸雷諾嗪遺傳毒性試驗研究
　　 目的：通過研究鹽酸雷諾嗪(Ranolazine，RZ)的遺傳毒性，評價其藥物安全性。方法采用Ames試驗、小

7、鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗和小鼠精子畸形試驗，檢測鹽酸雷諾嗪的遺傳毒性。Ames試驗選用兩種方法：直接法和代謝活化法。試驗菌株為鼠傷寒沙門氏組氨酸缺陷型菌株TA97、TA98、TA100和TA102，鹽酸雷諾嗪在試驗中設(shè)6個劑量組((5000、2500、1000、500、250和125μg/皿)，同時設(shè)自發(fā)回復(fù)突變對照組和陽性對照組：小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗和小鼠精子畸形試驗，每項試驗設(shè)3個鹽酸雷諾嗪給藥組(222、111和55 m

8、g/kg)、陰性對照組(Veh)及陽性對照組(CP40 mg/kg。結(jié)果鹽酸雷諾嗪在≤5000μg/皿所測劑量范圍內(nèi)，對TA97、TA98、TA100和TA102四種菌株，加入和不加入S9的各劑量組對四種菌株回變菌落數(shù)與陰性對照組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)，且無劑量反應(yīng)關(guān)系；鹽酸雷諾嗪在55～222mg/kg劑量范圍內(nèi)，小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核數(shù)及小鼠精子畸變率與陰性對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論鹽酸雷諾嗪在