黃芪甲苷的抗氧化應(yīng)激作用對體外高糖刺激足細胞的保護作用.pdf

1、目的：
　　1．觀察高糖對體外培養(yǎng)腎小球足細胞SOD、MDA、CAT、GSH-Px活性的影響，探討高糖對足細胞的氧化應(yīng)激作用。
　　2．觀察足細胞活性、整合素連接激酶ILK表達量和各氧化應(yīng)激指標活性，探討黃芪甲苷對高糖刺激下體外足細胞損傷的抗氧化應(yīng)激保護作用，及其可能機制。
　　方法：
　　按照經(jīng)典方法體外培養(yǎng)小鼠足細胞系，并將已分化的足細胞用1%胎牛血清培養(yǎng)24h后隨機分組：①正常對照組（NG）：D-葡萄糖5m

2、mol/L；②高滲對照組（MA）：甘露醇25mmol/L+D-葡萄糖5mmol/L；③高糖刺激組（HG）：D-葡萄糖30mmol/L；④DMSO組；⑤高糖刺激+AS-IV干預(yù)組：D-葡萄糖30mmol/L+不同劑量（5、15、30 ug/ml）AS-IV。培養(yǎng)72h后采用CCK-8法在450nm處檢測各組足細胞活性；根據(jù)南京建成氧化應(yīng)激試劑盒，運用硫代巴比妥法和黃嘌呤氧化酶法測定細胞中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性，

3、運用分光光度計法和化學(xué)比色法檢測過氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）水平；同時應(yīng)用western印跡法檢測細胞整合素連接激酶ILK蛋白表達量。
　　結(jié)果：
　　1.高糖對足細胞活性的影響及不同劑量黃芪甲苷的干預(yù)作用：HG與正常對照組相比，活性明顯下降；而黃芪甲苷干預(yù)組與HG組對比，隨著劑量的增加，細胞活性呈上升趨勢，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）。MA組與正常對照組、DMSO和HG組之間無明顯差異。<

4、br>　　2.高糖對足細胞氧化應(yīng)激MDA、SOD、CAT和GSH-Px活性影響及不同劑量黃芪甲苷干預(yù)作用后影響：HG組較NG組SOD、CAT、GSH-Px活性明顯下降、MDA含量明顯升高；而黃芪甲苷干預(yù)組較SOD、CAT、GSH-Px活性明顯上升、MDA含量明顯下降，在HG+30ug/ml AS-IV組最明顯，并且具有劑量依賴性。差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.高糖對足細胞ILK整合素連接激酶蛋白表達水平的影響及不同

5、劑量黃芪甲苷干預(yù)后影響：HG組足細胞ILK整合素連接激酶蛋白表達量較NG組明顯上升；在AS-IV干預(yù)72h后ILK整合素連接激酶蛋白表達量較NG組明顯下降，也呈劑量依賴性，在30ug/ml上效果最好;差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。此結(jié)果與氧化應(yīng)激指標相吻合。
　　結(jié)論：
　　1.高糖可引起足細胞氧化應(yīng)激損傷，并顯著增加整合素連接激酶ILK的表達水平。
　　2.黃芪甲苷可呈劑量依賴性抑制高糖對體外足細胞氧化應(yīng)激損傷