Caspase-3酶活性與突變ataxin-3蛋白聚積物形成的關(guān)系.pdf

1、中南大學(xué)碩士學(xué)位論文Caspase3酶活性與突變ataxin3蛋白聚積物形成的關(guān)系姓名：許波申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：唐北沙20040501方法1構(gòu)建pEGFP—MJDl0Q瞬時表達(dá)細(xì)胞模型和pEGFPMJD75Q瞬時表達(dá)細(xì)胞模型，分別在轉(zhuǎn)染48h后，檢測pEGFPMJDl0Q和pEGFP—MJD75Q表達(dá)水平，利用熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察蛋白聚積物形成，比色法測定caspase3酶的活性。2利用caspase3

2、酶活性誘導(dǎo)劑放線菌素D(ActD)對pEGFP—MJD75Q瞬時表達(dá)細(xì)胞模型進(jìn)行干預(yù)，應(yīng)用熒光顯微鏡進(jìn)行含蛋白聚積物的細(xì)胞計數(shù)，比色法測定caspase3酶活性。3利用caspase一3酶抑制劑(Ac—IETDCHO)對pEGFPMJD75Q瞬時表達(dá)細(xì)胞模型進(jìn)行干預(yù)，應(yīng)用熒光顯微鏡進(jìn)行含蛋白聚積物的細(xì)胞計數(shù)，比色法測定caspase一3酶活性。結(jié)果1WestemBlotting分析證實pEGFP—MJDl0Q瞬時表達(dá)細(xì)胞模型和pEGFP

3、—MJD75Q瞬時表達(dá)細(xì)胞模型構(gòu)建成功，pEGFPMJDl0Q瞬時表達(dá)細(xì)胞模型內(nèi)，pEGFPMJDl0Q表達(dá)分布比較彌散并且細(xì)胞核內(nèi)沒有明顯蛋白聚積物形成；而pEGFPMJD75Q瞬時表達(dá)細(xì)胞模型內(nèi)，pEGFP—MJD75Q表達(dá)能在細(xì)胞核內(nèi)形成致密蛋白聚積物。含有異常擴(kuò)展polyQ肽鏈的ataxin3蛋白可以誘導(dǎo)caspase一3酶活性升高。2應(yīng)用放線菌素D干預(yù)pEGFPMJD75Q瞬時表達(dá)細(xì)胞模型后，含蛋白聚積物的細(xì)胞數(shù)目明顯增加，c