布地奈德協(xié)同TGF-β誘導(dǎo)人支氣管上皮細(xì)胞和胎肺成纖維細(xì)胞中纖維粘連蛋白表達(dá).pdf

1、目的:探討布地奈德對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β)誘導(dǎo)人胎肺成纖維細(xì)胞(HFL-1)、人支氣管上皮細(xì)胞(HBEC)中細(xì)胞外基質(zhì)成分纖維粘連蛋白(FN)的表達(dá)的影響。 方法:經(jīng)原代培養(yǎng)傳代獲得的人支氣管上皮細(xì)胞和胎肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)，在5％CO2或95％空氣，37℃的孵箱中，在100mm的組織培養(yǎng)皿中，經(jīng)酶解消化后以1×10<'5>的細(xì)胞接種于12孔板，細(xì)胞融合后，用無(wú)血清、無(wú)生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)基沖洗2-3遍，饑餓24小時(shí)。培養(yǎng)人胎肺成纖維

2、細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)前新鮮無(wú)血清培養(yǎng)液中加入及不同濃度的布地奈德同時(shí)加入TGF-β2、TGF-β3后共同孵育48小時(shí)。培養(yǎng)的人支氣管上皮細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)前，新鮮的無(wú)生長(zhǎng)因子培養(yǎng)基中加入TGF-β的亞型TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、布地奈德或同時(shí)加入布地奈德與TGF-β共同孵育24小時(shí)。到規(guī)定的時(shí)間，回收上清液，儲(chǔ)存在-80℃，計(jì)數(shù)各孔細(xì)胞，ELISA法檢測(cè)上清夜中纖維粘連蛋白。 結(jié)果: ①人胎肺成纖維細(xì)胞與不同濃度的布地奈德

3、孵育48小時(shí)，隨劑量的增加，纖維粘連蛋白的表達(dá)增加，是基礎(chǔ)分泌量的5-6倍，呈劑量依賴性。 ②TGF-β2、TGF-β3誘導(dǎo)人胎肺成纖維細(xì)胞釋放纖維粘連蛋白，在不同濃度的布地奈德分別和TGF-β2、TGF-β3與共同孵育48小時(shí)后，隨布地奈德劑量的增加TGF-β2、TGF-β3能誘導(dǎo)釋放的纖維粘連蛋白進(jìn)一步顯著增加。與單用TGF-β組相比p<0.05。 ③布地奈德、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3與人支氣管上皮細(xì)

4、胞共同孵育24小時(shí)后，布地奈德和TGF-βs均能顯著增加纖維粘連蛋白的釋放， ④布地奈德與FGF-β聯(lián)用后，纖維粘連蛋白的釋放進(jìn)一步增加(p<0.05)。 結(jié)論: ①布地奈德能增加人胎肺成纖維細(xì)胞纖維粘連蛋白的分泌，并呈劑量依賴性。布地奈德協(xié)同TGF-β2、TGF-β3誘導(dǎo)人胎肺成纖維細(xì)胞中纖維粘連蛋白的分泌并呈劑量依賴性。 ②TGF-βs、布地奈德均促進(jìn)人支氣管上皮細(xì)胞中纖維粘連蛋白的合成，同時(shí)布地奈德