人臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞在造血干細(xì)胞共移植治療中應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、Yl王09218分類號：R55學(xué)校代碼：10392學(xué)號：博2003005福建醫(yī)科大學(xué)博士研究生畢業(yè)論文人臍帶源聞充質(zhì)干細(xì)胞在造血干細(xì)胞共移植治療中應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)研究Theeffectsofcotransplantationofhumanumbilicalcordderivedmesenchymaistemcells011hematopoieficstem／progenitorcelltransplantation所在院(系)：協(xié)和臨床學(xué)院博

2、士研究生：張浪輝學(xué)科(專業(yè))：內(nèi)科學(xué)(血液病)導(dǎo)師：陳志哲教授韓忠朝教授研究起止日期；2003年8月至2007年3月二oo七年三月人臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞在造血干細(xì)胞共移植治療中應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)研究博士研究生：張浪輝導(dǎo)師：陳志哲教授韓忠朝教授劉擁軍副教授摘要目的本研究旨在建立一種分離、培養(yǎng)擴(kuò)增臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞(humanumbilicalcordderivedmesenchymalstemcell，hUCMSC)的方法，通過對其基本生物學(xué)特性以

3、及在促進(jìn)造血細(xì)胞歸巢，提高造血干細(xì)胞植入與造血重建、調(diào)節(jié)移植免疫中作用的研究，在臨床前水平驗(yàn)證hUCMSC支持造血的功能，以期找到一條通過hUCMSC與造血干細(xì)胞共移植治療來提高造血干細(xì)胞移植成功率的有效途徑，以滿足臨床上日益增多的移植需求。方法研究分四個部分：1首先建立hUCMSC分離和培養(yǎng)擴(kuò)增的方法并通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)，細(xì)胞增殖和傳代培養(yǎng)生長曲線的繪制，成纖維樣細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期與免疫表型分析對其基本生物學(xué)特性進(jìn)行

4、研究。2通過RT—PCR檢測huC—MSC支持造血、促進(jìn)造血?dú)w巢與植入相關(guān)分子表達(dá)；通過造血干祖細(xì)胞集落培養(yǎng)了解hUCMSC維系造血的能力；通過示蹤技術(shù)檢測移植后24h，hUC—MSCs在NOD／ScID小鼠的體內(nèi)分布以及其引導(dǎo)造血細(xì)胞在小鼠體內(nèi)歸巢的情況。3通過流式細(xì)胞儀檢測hUc—MSC對臍帶血T細(xì)胞及各亞型早期激活標(biāo)志—CD69表達(dá)的影響和M幾法檢測hUC—MSC對臍帶血T細(xì)胞增殖的影響以了解其對T細(xì)胞免疫功能的調(diào)節(jié)作用。4最后通

5、過建立hUCMSC與臍帶血共移植NOD／SCIDdx鼠的動物模型，分析移植存活率和造血植入程度()kCD45細(xì)胞嵌合率)，在臨床前動物實(shí)驗(yàn)水平了解hUCMSC對造血干細(xì)胞移植的影響。結(jié)果通過本法分離、培養(yǎng)的原代hUCMSC于接種后2448h內(nèi)貼壁，6一lOd后可見成纖維細(xì)胞樣克隆形成(Unitfibroblastlikecolonyforming，CFU—F)，集落計數(shù)平均每459士76個臍帶單個核細(xì)胞可形成1個CFUF，23w后即可傳