強(qiáng)化Streptococcus zooepidemicus H24高產(chǎn)透明質(zhì)酸的策略研究.pdf

1、透明質(zhì)酸(HyaluronicacidorHyaluronan，簡(jiǎn)稱HA)是一種直鏈高分子粘多糖，具有獨(dú)特的“鎖水”功能。HA在化妝品、外傷及關(guān)節(jié)和眼科手術(shù)、眼藥水等方面有廣泛的應(yīng)用。 為了進(jìn)一步加強(qiáng)StreptococcuszooepidemicusH24發(fā)酵生產(chǎn)HA的能力，本研究采用氧化脅迫、增加細(xì)胞膜透性、強(qiáng)化細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)等技術(shù)策略，從微生物生理生化方面探討了自由基、表面活性劑、營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑在進(jìn)一步提高獸疫鏈球菌發(fā)酵生產(chǎn)HA的潛

2、能。主要研究結(jié)果如下： 對(duì)StreptococcuszooepidemicusH24的氧化脅迫作用進(jìn)行了研究。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在接種前用0.05μL/mL的NaClO處理種子液，可對(duì)菌體產(chǎn)生自發(fā)突變的作用，使HA的產(chǎn)量提高21％；而在發(fā)酵4h時(shí)添加0.1mmol/LH2O2使菌體調(diào)動(dòng)自我保護(hù)機(jī)制而大量合成莢膜，HA的產(chǎn)量可提高20％。 研究了不同類型表面活性劑對(duì)獸疫鏈球菌StreptococcuszooepidemicusH

3、24菌體生長(zhǎng)和透明質(zhì)酸發(fā)酵的影響，在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究了2.5L發(fā)酵罐中陽離子型表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)的添加對(duì)透明質(zhì)酸發(fā)酵的影響。結(jié)果表明：發(fā)酵罐上8-12h流加CTAB可使獸疫鏈球菌細(xì)胞莢膜脫落，促使透明質(zhì)酸的產(chǎn)量由5.1g/L提高到5.7g/L，增加11.8％。 研究了2.5L發(fā)酵罐中氮源濃度及一次性補(bǔ)糖濃度對(duì)透明質(zhì)酸產(chǎn)量及分子量的影響，20g/L的酵母粉最利于HA的合成，其產(chǎn)量達(dá)到4.7g/L，最終發(fā)

4、酵液中HA的平均分子量達(dá)到2.00×106Da；HA發(fā)酵10h補(bǔ)加30g/L的葡萄糖，HA的產(chǎn)量和分子量都有所提高，其產(chǎn)量到達(dá)5.3g/L，HA平均分子量達(dá)到2.14×106Da。 2.5L發(fā)酵罐中，在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加0.005g/L的尿嘧啶，HA合成速率加快，產(chǎn)量達(dá)到5.5g/L，HA平均分子量達(dá)到2.20×106Da；2.5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵培養(yǎng)基中添加0.005g/L尿嘧啶并在HA發(fā)酵10h時(shí)補(bǔ)加30g/L的葡萄糖，HA的產(chǎn)