隱性脊椎裂胎鼠支配腓腸肌的脊髓感覺及運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元定量研究.pdf

1、目的： 神經(jīng)管缺陷(neural tube defects NTDs)是常見的先天性畸形，也是世界衛(wèi)生組織常規(guī)監(jiān)測(cè)的先天性畸形之一。脊椎裂是神經(jīng)管畸形中最常見的一種類型，其中包括顯性脊椎裂和隱性脊椎裂。顯性脊椎裂脊髓病變較重，常伴有嚴(yán)重的二便失禁和肢體的感覺運(yùn)動(dòng)功能障礙，很多患者需要終身治療，明顯影響生活質(zhì)量。隱性脊椎裂脊髓病變較輕，有時(shí)合并輕度脊髓畸形和椎管內(nèi)脂肪瘤，患兒剛出生時(shí)可以沒有任何癥狀，但隨時(shí)間推移個(gè)別患兒可出現(xiàn)脊髓

2、栓系綜合癥表現(xiàn)，治療非常困難，一些患兒即使經(jīng)過(guò)積極的治療(包括手術(shù)治療)，仍然存在不同程度的無(wú)法糾正的功能障礙。關(guān)于隱性脊柱裂的脊髓病理改變和出現(xiàn)臨床癥狀的機(jī)制目前尚不清楚。本試驗(yàn)通過(guò)應(yīng)用維甲酸制作脊椎裂的動(dòng)物模型，采用胎兒外科、顯微外科和逆向神經(jīng)示蹤相結(jié)合的技術(shù)，探討隱性脊椎裂胎鼠支配腓腸肌的感覺和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元發(fā)育情況，為進(jìn)一步研究隱性脊椎裂的發(fā)生機(jī)制及改進(jìn)治療方法打下必要的前期理論基礎(chǔ)。 實(shí)驗(yàn)方法： 1、制作動(dòng)物模型體

3、重240-300g健康成熟未孕的Wistar。大鼠，在確定懷孕的第10天，胃管灌入維甲酸135 mg/kg(橄欖油混懸液，40 mg/ml)的孕鼠為致畸組；經(jīng)胃管注入等量的橄欖油的孕鼠作為對(duì)照組。 2、胎兒外科手術(shù)與顯微注射在大鼠懷孕20天時(shí)，10％水合氯醛腹腔注射麻醉，應(yīng)用胎兒外科顯微手術(shù)和顯微注射技術(shù)，在立體顯微鏡下用纖細(xì)玻璃針將5％熒光金注入胎鼠腓腸肌。 3、示蹤神經(jīng)元觀察與統(tǒng)計(jì)顯微注射的胎鼠存活24小時(shí)后，左心室

4、穿刺主動(dòng)脈灌注生理鹽水沖洗后，4％多聚甲醛進(jìn)行灌注固定；顯微鏡下觀察胎鼠有無(wú)畸形，剪開腰骶段脊椎表面皮膚，觀察腰骶段脊椎是否裂開，解剖并取出腰骶段脊髓。放入4％多聚甲醛中固定24小時(shí)，再放入20％蔗糖溶液中，24小時(shí)后連續(xù)冰凍橫切片，熒光顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)熒光金標(biāo)記的感覺及運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目，通過(guò)數(shù)碼照相系統(tǒng)將圖片掃描并存儲(chǔ)計(jì)算機(jī)硬盤內(nèi)，觀察對(duì)比對(duì)照組、給藥后外觀正常組和隱性脊椎裂組感覺和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的數(shù)目、形態(tài)和分布，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。