金黃色葡萄球菌對(duì)奎奴普丁-達(dá)福普汀耐藥性及耐藥機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，SA)特別是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin resistant Staphylococcus aureus, MRSA）是醫(yī)院感染的重要病原菌之一。隨著糖肽類抗菌藥物在臨床上的廣泛應(yīng)用逐漸造成MRSA對(duì)此類藥物的敏感性降低，常導(dǎo)致臨床治療失敗?？斩?達(dá)福普汀于1999年9月被美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(food and drug admini

2、stration，F(xiàn)DA)批準(zhǔn)后，盡管在治療萬(wàn)古霉素療效不佳的多重耐藥MRSA感染中表現(xiàn)出良好的療效，但該藥在上市后不久即出現(xiàn)耐藥株[2，3]。本研究旨在調(diào)查本地區(qū)金黃色葡萄球菌對(duì)奎奴普丁/達(dá)福普汀的耐藥情況及其耐藥機(jī)制。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)菌株來(lái)自2003年1月至2013年9月溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床標(biāo)本分離的共1476株金黃色葡萄球菌，并剔除重復(fù)性菌株。采用紙片擴(kuò)散法(K-B法)檢測(cè)1476株金黃色葡萄球菌對(duì)奎奴普

3、丁/達(dá)福普汀的耐藥情況。菌種鑒定采用革蘭染色、過(guò)氧化氫酶實(shí)驗(yàn)、凝固酶試驗(yàn)和VITEK全自動(dòng)細(xì)菌檢測(cè)儀(bioMe'rieu，Marcy l，Etoile，F(xiàn)rance)。用K-B法檢測(cè)金黃色葡萄球菌對(duì)臨床常見的18種抗菌藥物的敏感性，使用E試驗(yàn)檢測(cè)奎奴普丁/達(dá)福普汀耐藥菌株對(duì)萬(wàn)古霉素的MIC值，瓊脂稀釋法檢測(cè)耐藥菌株對(duì)奎奴普丁/達(dá)福普汀的MIC值。PCR檢測(cè)奎奴普丁/達(dá)福普汀的耐藥基因，DNA測(cè)序確定其基因型。分別用葡萄球菌染色體盒me

4、c(SCCmec)基因分型、葡萄球菌A蛋白序列分析(spa)分型、多位點(diǎn)基因序列分型(multilocus sequence typing，MLST)對(duì)所檢測(cè)的耐藥菌株進(jìn)行分子分型。
　　結(jié)果：
　　1.藥敏結(jié)果:在1476株金黃色葡萄球菌臨床菌株中，775株為MRSA，其中3株MRSA菌株對(duì)奎奴普丁/達(dá)福普汀完全耐藥，表現(xiàn)為K-B法無(wú)抑菌圈出現(xiàn)，分別命名為MRSA WZ1031、MRSA WZ414和MRSA WZ480。

5、金黃色葡萄球菌對(duì)奎奴普丁/達(dá)福普汀的耐藥率為0.2％(3/1476)，MRSA菌株中耐藥率為0.4％(3/775)?？斩?達(dá)福普汀耐藥的3株菌株除了對(duì)頭孢克洛與氯霉素的藥敏結(jié)果不完全相同，對(duì)其余16種抗菌藥物的敏感性都相同。
　　2.耐藥基因檢測(cè):此3株奎奴普丁/達(dá)福普汀耐藥的MRSA菌株通過(guò)PCR擴(kuò)增耐藥基因及DNA序列檢測(cè)確定擴(kuò)增產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)5個(gè)與鏈陽(yáng)菌素B耐藥相關(guān)的基因陽(yáng)性，包括ermA，ermB, ermC, msrA及

6、msrB以及2個(gè)與鏈陽(yáng)菌素A耐藥相關(guān)的基因，包括vatC和vgaA陽(yáng)性。
　　3.奎奴普丁/達(dá)福普汀耐藥MRSA的分子分型:3株耐藥菌株中，MRSA WZ1031屬于ST9-MRSA-SCCmecV-t899， MRSA WZ414及MRSA WZ480屬于ST9-MRSA-SCCmecNT-t899。ST9型MRSA主要與家畜感染有關(guān)，而分離的3株ST9型MRSA分別來(lái)自三位患者，三位患者中并未發(fā)現(xiàn)動(dòng)物密切接觸史。
　　結(jié)