農(nóng)桿菌介導(dǎo)HbNHX-,1-基因遺傳轉(zhuǎn)化小青楊的研究.pdf

1、楊樹隸屬楊柳科(Salicaceae)楊屬(Populus)，其基因組較小，是根癌農(nóng)桿菌的天然宿主，已經(jīng)成為林木遺傳改良研究的模式樹種。小青楊(Populus pseudo-simoniiKitag)是青楊派的一種，廣泛分布于東北平原地區(qū)。其樹干挺直、生長迅速、易繁殖、適應(yīng)性強，具有防風(fēng)固沙、改善生態(tài)環(huán)境、調(diào)節(jié)氣候、綠化環(huán)境、提供木材等重要作用。小青楊在土壤的pH7.5～8.5條件下生長較好，但是在土壤pH值超過8.5時，其生長狀況就會

2、降低。在我國北方許多地區(qū)(包括吉林省西部地區(qū))鹽堿地較多，土壤pH較高。為了提高鹽堿地的利用率，本文試圖通過農(nóng)桿菌EHA105介導(dǎo)法，將能夠提高植物耐鹽堿能力的Na<'+>/H<'+>逆向轉(zhuǎn)運蛋白的基因HbNHX<,1>(來自短芒野大麥，Hordeum brevisubulamm)導(dǎo)入小青楊中，以提高其耐鹽堿能力。這對于選育耐鹽堿小青楊新品(系)種具有重要的理論和實踐意義。 本文研究取得的結(jié)果如下： 1.以小青楊莖段為外

3、植體，建立了小青楊無性繁殖體系。經(jīng)研究，誘導(dǎo)莖段愈傷組織形成及分化的最適培養(yǎng)基為在MS基本培養(yǎng)基上附加6-BA0.2 mg.L<'-1>和NAA2mg.L<'-1>；最適生根培養(yǎng)基為1/2 MS。通過此培養(yǎng)基配方能夠快速、有效、穩(wěn)定的建立起小青楊的無性繁殖體系，為小青楊的轉(zhuǎn)化奠定了基礎(chǔ)。 2.以再生小青楊試管苗的莖段為農(nóng)桿菌EHA105轉(zhuǎn)化受體，建立了小青楊遺傳轉(zhuǎn)化體系，確定出卡那霉素(Kan)對小青楊愈傷組織的臨界篩選濃度為5

4、0 mg.L<'-1>，對試管苗生根時的臨界濃度為25 mg.L<'-1>。 3.對經(jīng)抗生素篩選得到的轉(zhuǎn)基因再生試管苗進行耐NaCl水平的測驗。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因小青楊試管苗在含有4 g.L<'-1>NaCl的耐鹽篩選培養(yǎng)基中的生根率達33％，而非轉(zhuǎn)基因小青楊試管苗卻并不生根。通過Kan抗性和耐NaCl試驗的篩選，共獲得25株轉(zhuǎn)化的小青楊試管苗，其外源基因的鑒定分析還有待于今后繼續(xù)進行。 4.本文提出了改善小青楊試管苗玻璃