農(nóng)桿菌介導codA基因遺傳轉(zhuǎn)化‘GF43’李的研究.pdf

1、毛桃是我國長江流域桃產(chǎn)區(qū)的最主要砧木，但其抗病蟲及抗逆能力相對較弱，且嫁接品種個體間生長不整齊，故在生產(chǎn)上有一定的局限性?！瓽F43’李是歐美桃生產(chǎn)大國廣泛使用的優(yōu)良的桃砧木，具有良好的耐澇性，能適應長江流域生長季高溫多濕的條件。然而‘GF43’李存在座果率低，扦插生根難，需要通過組織培養(yǎng)快速獲得大量遺傳穩(wěn)定、生長一致的苗木用于生產(chǎn)?！瓽F43’李存在不抗寒缺陷，需要通過育種進一步改良。由于果樹遺傳背景復雜，采用常規(guī)方法改良砧木品種難度

2、較大。隨著現(xiàn)代生物技術的發(fā)展，植物轉(zhuǎn)基因技術得到廣泛應用?；蜣D(zhuǎn)化可以有目的地改善不利性狀，是砧木品種改良的有效新途徑。
　　 本試驗建立了歐洲李（Prunus domestica)的實生后代‘GF43’李快繁體系、高效再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化體系，并用農(nóng)桿菌介導法將細菌乙酰膽堿氧化酶codA基因轉(zhuǎn)入‘GF43’李中，以期獲得攜帶具有普遍抗性的‘GF43’李新種質(zhì)。研究結果如下：
　　 1.‘GF43’李的高效快繁體系研究發(fā)現(xiàn)

3、：消毒方法以75％的酒精浸潤20s,0.1％HgCl2+0.01％吐溫對外植體表面消毒6min為最佳；MS+6-BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L的啟動培養(yǎng)基最利于腋芽萌發(fā)；LP＋6-BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L的繼代增殖培養(yǎng)基上試管芽增殖倍數(shù)最高(5.6倍/30d)，且植株生長健壯；篩選出的適宜生根培養(yǎng)基為LP+IAA0.5mg/L+0.1％活性炭，適宜的移栽基質(zhì)為珍珠巖：蛭石：草炭土為1:1：1的配比。
　　

4、 2.通過對基本培養(yǎng)基的類型、生長調(diào)節(jié)劑種類和濃度、暗培養(yǎng)時間、葉片放置方式等因素對‘GF43’李葉片再生頻率影響的研究，發(fā)現(xiàn)TDZ比6-BA能更有效的誘導葉片不定芽的再生；生長素IBA、葉片近軸面接觸培養(yǎng)基的接種方式和培養(yǎng)基中添加蔗糖是誘導不定芽再生的關鍵因子；14d的葉片作外植體，以及培養(yǎng)初期進行2d的暗培養(yǎng)可以大幅度提高再生頻率。通過再生體系優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)14d葉片，近軸面接種在LP＋TDZ3.0mg/L+IBA1.0mg/L＋蔗糖

5、30g/L培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)2天，再轉(zhuǎn)為光照培養(yǎng)30d時，再生率可以達到85.2％，不定芽平均再生數(shù)量為6.4個/葉塊。
　　 3.對‘GF43’李葉片侵染時間、共培養(yǎng)時間、抑菌素種類和濃度、不同選擇壓等遺傳轉(zhuǎn)化影響因素的研究。獲得的‘GF43’李遺傳轉(zhuǎn)化體系為，在農(nóng)桿菌濃度OD600=0.5時，葉片經(jīng)農(nóng)桿菌浸染5min，在LP+TDZ3.0mg/L+IBA1.0mg/L+30g/L蔗糖培養(yǎng)基上共培養(yǎng)3d（暗培養(yǎng)2d）后，添加Cb