高原大鼠嚴重燒傷延遲復蘇后氧化應激對腸上皮細胞凋亡及凋亡相關基因表達的影響.pdf

1、目的：探討高原地區(qū)不同海拔高度大鼠嚴重燒傷延遲復蘇后氧化應激反應對腸屏障結(jié)構(gòu)的影響。 方法：將Wistar大鼠132只分為蘭州組(1517m)和高原組(3840 m)，蘭州組包括蘭州即時復蘇組(LIFR，n=30)、蘭州延遲復蘇組(LDFR，n=30)、蘭州假傷組(LCG，n=6)，高原組包括高原即時復蘇組(HIFR，n=30)、高原延遲復蘇組(HDFR，n=30)、高原假傷組(HCG，n=30)。大鼠背部30％TBSA(總體表

2、面積)Ⅲ度燙傷后，立即或傷后6 h液體復蘇，分別于傷后6h，12h，24h，48h和72h取材。采用組織病理學觀察、原位末端標記(TUNEL)法、免疫組織化學染色與圖象分析技術(shù)，在動態(tài)觀察小腸粘膜病理學變化的基礎上，觀察不同海拔高度嚴重燒傷延遲復蘇后小腸粘膜中丙二醛(MDA)和總巰基(TSH)變化及凋亡相關基因bax、bcl-2、HIF-1α蛋白表達的變化。并檢測了不同海拔高度嚴重燒傷延遲復蘇后腸上皮細胞凋亡率(原位末端標記法)。探討腸

3、上皮細胞中的MDA、TSH含量變化及凋亡相關基因bax、bcl-2、HIF-1α蛋白表達變化與腸上皮細胞凋亡的關系。 結(jié)果：1.隨著海拔高度的增加，HE染色可見大鼠燒傷后小腸粘膜出現(xiàn)腫脹且有炎性細胞浸潤，小腸粘膜結(jié)構(gòu)紊亂，腸粘膜內(nèi)空泡樣結(jié)構(gòu)逐漸增多，并可見凋亡小體，HDFR組較LDFR組變化明顯。2.大鼠燒傷后小腸粘膜中MDA含量顯示高原實驗組高于蘭州實驗組(P<0.05)；兩個高度大鼠燒傷后小腸粘膜中MDA含量示延遲復蘇組(D

4、FR)高于即時復蘇組(IFR)(P<0.05)；在傷后12h，小腸粘膜MDA含量最高(P<0.01)；傷后實驗各組MDA含量均高于假傷組(CG)(P<0.01)；這與小腸粘膜中TSH含量變化相反；3.腸上皮細胞中bax、bcl-2、HIF-1α蛋白表達檢測陽性染色均位于細胞核或胞漿， bax、HIF-1α蛋白表達強度實驗組高于對照組，隨海拔梯度上升大鼠傷后bax、HIF-1α蛋白表達增強，各海拔高度DFR組表達強度高于IFR組(P<0.

5、05)，在海拔3840m DFR組傷后12h表達最強；bcl-2基因表達高原地區(qū)致傷動物均為陰性結(jié)果，蘭州地區(qū)傷后6h，12h為陰性表達，其他情況為弱陽性表達。4.TUNEL法檢測凋亡細胞顯示凋亡細胞陽性染色主要位于細胞核，隨海拔梯度上升大鼠傷后小腸上皮細胞凋亡率增高，各海拔高度DFR組腸上皮細胞凋亡率高于IFR組(P<0.05)，在海拔3840m DFR組12h表達最高；5.HDFR組MDA含量與 bax表達強度的變化呈顯著正相關(r

6、=0.938，P<0.05)、與細胞凋亡光密度值呈顯著正相關(r=0.899，P<0.05)；TSH含量與與HDFR組bax表達強度的變化呈顯著負相關(r=-0.934，P<0.05)、與細胞凋亡光密度值呈顯著負相關(r=-0.948，P<0.05)。 結(jié)論：1.隨海拔高度的增加，高原組大鼠嚴重燒傷延遲復蘇后腸粘膜病理學損傷較蘭州組明顯加重；2.氧化應激反應是高海拔地區(qū)大鼠嚴重燒傷延遲復蘇腸屏障損傷的重要因素；3.bax和bcl