蕓香苷對人晶體上皮細(xì)胞氧化損傷和凋亡保護作用及相關(guān)基因表達的研究.pdf

1、目的
　　國內(nèi)外研究一直認(rèn)為,氧化損傷是各種原因誘發(fā)年齡相關(guān)性白內(nèi)障的共同作用機制,晶狀體上皮細(xì)胞(LEC)凋亡是所有非先天性白內(nèi)障發(fā)生得共同通路。年齡相關(guān)性白內(nèi)障LEC中Bcl-2基因表達為陰性,而Bax,Caspase-3表達為陽性。本課題以此為理論依據(jù),研究黃酮類化合物蕓香苷(Ru)對過氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細(xì)胞(HLEC)氧化損傷和凋亡的保護作用及Ru對相關(guān)凋亡基因Bcl-2,Bax,Caspase-3轉(zhuǎn)錄水

2、平表達的影響。
　　方法
　　(1)正常培養(yǎng)的SRA01-04系HLEC,分別加入不同濃度的Ru和H2O2,共同培養(yǎng)24h,MTT法檢測各組細(xì)胞生存活力,以確定有效的Ru和H2O2實驗濃度。
　　(2)用濃度為0,25,50,100μmol/L的Ru預(yù)處理HLEC1h,再分別加入200μmol/LH2O2共同培養(yǎng)24h,MTT法檢測Ru對各預(yù)處理組細(xì)胞增殖活性的影響。
　　(3)收集各組細(xì)胞裂解液,比色法檢測超氧

3、化物歧化酶(SOD)活性,酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法檢測還原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量。
　　(4)制作細(xì)胞爬片,TUNEL法染色各組凋亡細(xì)胞,觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)并計算凋亡指數(shù)(AI)。
　　(5)收集各組細(xì)胞提取總RNA,實時熒光定量PCR(RT-qPCR)技術(shù)檢測各組細(xì)胞Bcl-2,Bax,Caspase-3mRNA水平表達。
　　結(jié)果：
　　(1)實驗發(fā)現(xiàn),H2O2濃度在200μmol

4、/L時接近細(xì)胞生存半數(shù)抑制率(IC50),因此選擇200μmol/LH2O2作為H2O2組實驗濃度。
　　(2)濃度小于100μmol/L的Ru對細(xì)胞增殖能力無顯著性影響;選擇25,50,100μmol/L的Ru分別作為Ru低劑量組、Ru中劑量組和Ru高劑量組濃度進行實驗。
　　(3)H2O2組HLEC增殖能力,SOD,GSH含量較對照組顯著下降、MDA和AI較對照組明顯增高(P<0.01);Bcl-2基因表達明顯下調(diào),Ba

5、x,Caspase-3基因表達明顯上調(diào)(P<0.05)。
　　(4)Ru(25,50,100μmol/L)預(yù)處理組與H2O2組相比,細(xì)胞生存率,抗氧化水平明顯提高,凋亡細(xì)胞數(shù)量顯著減少(P<0.01);Bcl-2基因表達量較H2O2組有所增加,Bax,Caspase-3基因表達明顯減少(P<0.05)。
　　結(jié)論
　　Ru可以提高HLEC增殖能力,保護H2O2誘導(dǎo)HLEC的氧化損傷和凋亡,其機制可能與Ru能夠上調(diào)Bcl