慢性丙型肝炎患者血清Th1-Th2相關細胞因子水平及其與干擾素療效關系的研究.pdf

1、目的: 探討慢性丙型肝炎患者血清Th1/Th2細胞因子水平變化及其與干擾素療效的關系。 材料和方法: 一、材料 1、研究對象 應用干擾素聯(lián)合利巴韋林治療的慢性丙型肝炎患者30例，男15例，女15例，年齡34—66歲，平均年齡48.5±8.11歲。治療療程為48周。療效判定：應答組：治療結束時ALT正常，HCVRNA陰轉(zhuǎn)，并持續(xù)半年以上；無應答組，治療結束時ALT未恢復正?；騂CVRNA持續(xù)陽性。正

2、常對照組15例：標本來自中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院體檢中心。 2、試劑與儀器 HCVRNA提取試劑：TRIZOL、氯仿、異丙醇、75％乙醇、DEPC水等；測序產(chǎn)物純化試劑：EDTA(PH8.0)，NaAc(PH5.2)，無水乙醇，70％乙醇，HiDiFormamide(甲酰胺)等；RT-PCR擴增反應試劑盒，PCR產(chǎn)物純化試劑盒及PCR反應引物購自TaKaRa(大連)有限公司；細胞因子IL—2、IFN—γ、IL—6、IL-

3、10、IL-12p40及IL-12p70檢測試劑盒購自北京晶美生物工程有限公司，IL—5購自上海森雄科技實業(yè)有限公司；PCR擴增儀：美國PE公司產(chǎn)品，型號PE2400；電泳儀，北京六一儀器廠；凝膠成像系統(tǒng)，SHIDZU公司；紫外分光光度計，型號UV—160A，USA；ABI3130全自動測序儀：AB I美國；XW—80A旋渦振蕩器：上海青浦瀘西儀器廠K10CD；干式恒溫器：杭州藍焰科技有限公司；低速自動平衡離心機：LD25—2A，北京醫(yī)

4、用離心機廠；臺式高速離心機：上海醫(yī)用分析儀器廠生產(chǎn)，型號TGL-16G；伯樂全自動酶標儀680，美國BIO—RAD公司；超低溫冰箱，MDF—1155—1520C，日本三洋公司；細胞恒溫培養(yǎng)箱，WJ—22C Maf． NO． W—1343，日本產(chǎn)。 二、方法 1、血清細胞因子檢測 采用ELISA法檢測血清IL—2、IL-10、IFN—γ、IL—5、IL—6、IL-12p40及IL-12p70，按試劑盒說明方法進行檢

5、測。 2、HCV基因分型檢測 采用直接測序法，根據(jù)5'UTR核苷酸序列進行分型。血清中提取HCV RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后，進行PCR擴增，擴增片斷大小約為450bp。PCR產(chǎn)物純化后由沈陽市傳染病院中心實驗室進行核苷酸序列測定。測序結果經(jīng)NCBI網(wǎng)站核對序列，確定HCV基因型。 3、HCVRNA載量檢測 采用特異性熒光探針PCR法，由中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院中心實驗室常規(guī)檢測。 4、血清ALT

6、檢測 由中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院中心實驗室應用美國貝克曼公司生產(chǎn)的8200A全自動生化分析儀常規(guī)檢測。 5.統(tǒng)計學分析 應用SPSS15.0軟件進行統(tǒng)計學檢驗，所用方法包括：均數(shù)的比較、X2檢驗和Biraviate相關性檢驗。P值<0.05為顯著性差異水平。 結果: 1、干擾素治療結果 30例患者中，應答組14例，無應答組16例，干擾素治療持續(xù)應答率46.7％。應答組和無應答組相比，年齡、

7、性別、體重及血清HCVRNA載量均無顯著差異，血清ALT水平明顯高于無應答組。應用Peg干擾素者應答率為62.5％，普通干擾素為40.9％，兩者無顯著性差異。 2、HCV基因型分布及不同基因型患者干擾素治療的應答率 基因型分布以1b型最多，占46.7％，其余依次為2a型20％、1a型13.3％、2b型10％、3a型6.7％和1c型3.3％。1b型應答率為35.7％，2a型為66.7％，但統(tǒng)計學比較無顯著性差異。

8、3、慢性丙型肝炎患者血清細胞因子水平的變化 慢性丙型肝炎組血清IL—2水平明顯低于健康對照組，IL—5和IL-12p40水平明顯高于后者，其它細胞因子水平兩組之間無顯著差異。 4、血清細胞因子水平與HCV基因型的關系 HCV基因型1型患者血清IL—6含量明顯高于2型患者，其它細胞因子水平無差異；而1型和3型以及2型和3型之間所有細胞因子水平均無顯著性差異。各亞型之間比較發(fā)現(xiàn)：2a型患者血清IL—2含量明顯低于2

9、b型。 5、血清細胞因子水平與ALT和HCVRNA載量的關系 血清IL—6含量與血清ALT水平呈正相關，與RNA載量呈負相關，其余細胞因子水平與ALT和HCVRNA載量無顯著性相關。 6、血清細胞因子水平與干擾素療效的關系 干擾素治療應答組和無應答組治療前血清細胞因子水平均無顯著性差異，應答組治療結束時IFN—γ水平較治療前明顯升高，其它細胞因子水平無顯著性差異。無應答組治療前后所有血清細胞因子水平均無顯

10、著性差異。 結論: 1、慢性丙型肝炎患者存在Th1/Th2細胞因子失衡，血清Th1細胞因子水平下降，Th2細胞因子水平升高可能與丙型肝炎慢性化有關。 2、IL—6可能與肝臟炎癥活動相關。 3、HCV基因型1型患者血清IL—6水平高于2型，2a型IL—2水平低于2b型，檢測的其它細胞因子水平與基因型無關。 4、干擾素治療前血清細胞因子水平與干擾素治療效果無關，不能對療效進行預測，干擾素誘導的Th1細