溶血磷脂酸抗缺氧無(wú)血清誘導(dǎo)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究.pdf

1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)是具有多向分化潛能的成體干細(xì)胞，在體外可以分化成為軟骨細(xì)胞，脂肪細(xì)胞，骨細(xì)胞等，它們對(duì)造血干細(xì)胞起支撐作用。BMSCs還可以表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，骨骼肌細(xì)胞等特有的表面標(biāo)志物。再加上BMSCs容易獲取、沒(méi)有免疫原性、無(wú)倫理學(xué)問(wèn)題等優(yōu)點(diǎn)，目前已經(jīng)成為治療缺血性心臟病的種子細(xì)胞之一。大量研究報(bào)道BMSCs移植到缺血心肌中有修復(fù)梗死心肌的潛能，但是由于移植入梗死心臟的BMSCs存活率很低，嚴(yán)重影響了

2、細(xì)胞的修復(fù)功能。我課題組前期研究發(fā)現(xiàn)BMSCs在缺氧無(wú)血清環(huán)境中發(fā)生凋亡現(xiàn)象。溶血磷脂酸(LPA)是一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的水溶性磷脂信使，主要通過(guò)5種G蛋白耦聯(lián)受體亞型發(fā)揮其廣泛的生物學(xué)功能，不僅可以促進(jìn)細(xì)胞骨架重排，還對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化及細(xì)胞的信息傳遞產(chǎn)生多種影響，在心血管系統(tǒng)也有重要的作用。 本文旨在研究以體外缺氧無(wú)血清條件模擬心肌缺血的微環(huán)境中，LPA對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的抗凋亡作用及其作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)分為5組，第

3、一組為對(duì)照組，正常培養(yǎng)；第二組為模型組，缺氧無(wú)血清聯(lián)合處理6h；第三組為L(zhǎng)PA1h組，先用25μmol/L LPA預(yù)處理1h，然后撤除LPA再進(jìn)行缺氧無(wú)血清處理6h；第四組為L(zhǎng)PA6h組，無(wú)預(yù)處理過(guò)程，加入25μmol/LLPA同時(shí)進(jìn)行缺氧無(wú)血清處理6h；第五組為L(zhǎng)PA1+6h組，先用25μmol/L LPA預(yù)處理1h，然后在保留LPA情況下進(jìn)行缺氧無(wú)血清處理6h。應(yīng)用Hoechst33342染色和膜聯(lián)蛋白V/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)觀(guān)察細(xì)胞

4、凋亡，并利用Western印跡方法檢測(cè)ERK1/2和Akt的磷酸化水平變化。研究結(jié)果表明缺氧無(wú)血清條件引起明顯的BMSCs凋亡細(xì)胞凋亡率為24.2±3.12，LPA處理6h和1+6h組細(xì)胞凋亡率較凋亡模型組顯著降低(P＜0.05)，細(xì)胞凋亡率分別為12.86±3.93、12.57±0.94。而1h組細(xì)胞凋亡率與缺氧無(wú)血清組無(wú)顯著性差異，細(xì)胞凋亡率為23.17±5.15。LPA處理組(1h，6h，1+6h組)ERK1/2磷酸化水平較缺氧無(wú)

5、血清組降低，Akt磷酸化水平較缺氧無(wú)血清組增高。在缺氧無(wú)血清環(huán)境中，LPA有利于增強(qiáng)BMSCs的抗凋亡能力。而且，本實(shí)驗(yàn)提示必須在持續(xù)存在的條件下，LPA才能維持促進(jìn)細(xì)胞存活的信號(hào)通路的開(kāi)放狀態(tài)，發(fā)揮抗缺氧無(wú)血清誘導(dǎo)的凋亡作用。根據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，LPA 6h和LPA 1+6h組細(xì)胞凋亡率無(wú)顯著性差異，說(shuō)明LPA對(duì)BMSCs進(jìn)行預(yù)處理效果不是很明顯，提示在進(jìn)行干細(xì)胞移植時(shí)不需用LPA進(jìn)行預(yù)處理便可在BMSCs注入心肌的同時(shí)注射LPA，改