化療藥物聯(lián)合野生型p53基因抑制Hela細胞的研究.pdf

1、目的： 探討化療藥物多西他賽、順鉑(DDP)單一、聯(lián)用以及與野生型p53基因(wtp53)聯(lián)合應用對宮頸癌Hela細胞的抑制作用。 方法： 1、體外培養(yǎng)宮頸癌Hela細胞。 2、應用脂質體轉染技術，將含有人野生型p53基因的pCMV-Script重組質粒導入宮頸癌Hela細胞中，篩選陽性克隆，并擴大培養(yǎng)，從而獲得p53轉染細胞組(p53-Hela組)。 3、以未轉染的Hela細胞為空白對照組，逆轉

2、錄一多聚酶鏈反應(RT-PCR)鑒定wtp53基因的表達，細胞計數(shù)試劑盒CCK-8染色法繪制細胞生長曲線，觀察wtp53基因對Hela細胞的增殖抑制作用。 4、使用化療藥物多西他賽、DDP單獨并聯(lián)合作用于Hela細胞及p53-Hela細胞，分別作用24小時與48小時，觀察細胞形態(tài)，使用CCK-8染色法檢測吸光度OD450值(即A值)，并計算細胞抑制率。 結果： 1、在G418選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)兩周后，成功地生長出陽

3、性細胞克隆，所得細胞命名為p53-Hela細胞，用RT-PCR法檢測到p53mRNA表達。野生型p53基因轉染后p53-Hela細胞中的p53mRNA表達增加，與對照組Hela細胞中的p53mRNA表達相比，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.01)。 2、通過對生長曲線的分析，p53-Hela細胞生長明顯慢于對照組Hela細胞(p＜0.05)，表明wtp53對Hela細胞具有抑制作用。 3、化療藥物多西他賽、DDP單獨及聯(lián)合應用

4、時，不同時間對宮頸癌He]a細胞都有抑制作用(p＜0.01)。各組藥物分別作用24h及48h后，對Hela細胞生長抑制作用表明：(1)細胞生存率隨藥物濃度的升高而降低，有明顯的劑量依賴性；(2)隨著作用時間的延長，其對應的細胞半數(shù)抑制率(IC50)逐漸下降，同一劑量的藥物有時間依賴性。 4、化療藥物多西他賽、DDP與wtp53聯(lián)合應用時，在一定范圍內均對宮頸癌Hela細胞有明顯的增殖抑制作用，并且聯(lián)合用藥組的作用明顯強于單獨用藥

5、組(p＜0.01)。wtp53可以增強多西他賽和DDP對Hela細胞的抑制作用，并呈濃度和時間依賴關系。以20.0ug/ml濃度的多西他賽聯(lián)合20.0ug/ml濃度的DDP作用24h、48h組抑制率最為顯著，分別為(94.733±0.55)％，(99.200±0.72)％。 5、wtp53可以增強多西他賽與DDP對Hela的抑制作用，與多西他賽、DDP單獨作用相比差異具有顯著性(p＜0.01)，多西他賽、DDP與wtp53聯(lián)合后

6、，可對Hela細胞產(chǎn)生更強的抑制作用。 結論： 1、CCK-8法為檢測化療藥物對腫瘤細胞的抑制率提供了簡便、快速的方法。 2、wtp53基因單獨應用時可對宮頸癌Hela細胞產(chǎn)生抑制作用。 3、化療藥物多西他賽、DDP單獨應用時，對宮頸癌Hela細胞都有抑制作用，且有明顯的劑量和時間依賴性，聯(lián)合應用時抑制作用更強。 4、化療藥物多西他賽、DDP與wtp53聯(lián)合應用時，對宮頸癌Hela細胞抑制作用較單