豬鏈球菌主要毒力基因的多重PCR檢測(cè)及其核糖體基因多態(tài)性研究.pdf

1、豬鏈球菌(Streptococcussuis，SS)是危害現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)的一種重要人獸共患病病原，該菌血清型多、抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，在臨床上可呈現(xiàn)不同的特征，如敗血癥、腦膜炎、心內(nèi)膜炎、肺炎、關(guān)節(jié)炎等，還常常與其他疾病合并感染，發(fā)病率和死亡率較高。由于目前對(duì)豬鏈球菌病的發(fā)生規(guī)律、病原特性以及防治措施還不是十分清楚，單純靠藥物又不能有效地控制該病的發(fā)生和蔓延。本研究在對(duì)山東地區(qū)分離的豬鏈球菌菌株進(jìn)行培養(yǎng)、鑒定基礎(chǔ)上，建立PCR方法進(jìn)行血清分型和毒力

2、基因檢測(cè)，并應(yīng)用核糖體基因探針雜交方法對(duì)部分地區(qū)的分離株進(jìn)行基因分型，以便為該病的免疫防治提供理論依據(jù)。本課題分為三個(gè)部分進(jìn)行研究。 1.山東省致病性豬鏈球菌血清型及耐藥性狀況調(diào)查通過革蘭氏染色鏡檢、生化試驗(yàn)、藥敏試驗(yàn)及PCR分型鑒定，對(duì)臨床分離的豬源鏈球菌進(jìn)行血清型和分子流行病學(xué)的初步研究。從山東省不同地區(qū)的發(fā)病豬分離到的20株豬源鏈球菌，其形態(tài)、染色、培養(yǎng)特征及理化特性均符合豬鏈球菌的特點(diǎn)，采用豬鏈球菌特異性鑒別引物分別進(jìn)行

3、PCR擴(kuò)增，確認(rèn)9株為豬鏈球菌，經(jīng)PCR分型，其中4株鑒定為1型菌株，沒有2、7、9型的菌株，其余未定型。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，山東地區(qū)豬鏈球菌僅對(duì)氨芐西林、阿米卡星、頭孢噻肟、頭孢唑啉敏感，而對(duì)其他常規(guī)藥物已產(chǎn)生了不同程度的耐藥性。 2.豬鏈球菌三種主要毒力基因的多重PCR檢測(cè)根據(jù)豬鏈球菌三種主要毒力因子Sly，MRP，EF的基因序列設(shè)計(jì)和合成了3對(duì)特異性引物，通過體系和反應(yīng)條件優(yōu)化，建立多重PCR檢測(cè)方法，對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存的16株背

4、景明確的豬鏈球菌進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示S1y檢出率為4/16，MRP檢出率為2/16，EF檢出率為0，陽性、陰性對(duì)照均成立。分析結(jié)果表明該多重PCR檢測(cè)方法，特異性和敏感性較好，可用于快速診斷以及豬鏈球菌相關(guān)毒力因子的分子流行病學(xué)調(diào)查。 3.豬鏈球菌核糖體基因多態(tài)性的研究為探討豬鏈球菌株的分子流行病學(xué)特征以及菌株間的相互關(guān)系，對(duì)山東和河南地區(qū)2003-2006年間分離的20株豬鏈球菌進(jìn)行核糖體基因多態(tài)性的研究。豬鏈球菌基因組DNA用