熊去氧膽酸對(duì)肝腫瘤細(xì)胞株誘導(dǎo)凋亡及抑制增殖的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:探討熊去氧膽酸(UDCA)對(duì)肝腫瘤細(xì)胞株誘導(dǎo)凋亡及抑制增殖的作用和機(jī)制。 方法:用四氮唑藍(lán)法檢測(cè)UDCA對(duì)肝腫瘤細(xì)胞株HepG2,BEL7402及正常肝細(xì)胞株L-02的增殖抑制作用;以流式細(xì)胞術(shù)、TUNEL和DNA凝膠電泳法測(cè)定UDCA誘導(dǎo)HepG2,BEL7402及L-02細(xì)胞凋亡的作用和其對(duì)細(xì)胞株增殖周期的影響;通過Wright-Giemsa染色法、電鏡觀察經(jīng)UDCA處理后細(xì)胞形態(tài)的改變;應(yīng)用RT-PCR、wester

2、nblot和免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)UDCA對(duì)上述三種細(xì)胞株的癌基因和抑癌基因bax、bcl-2、c-myc、N-ras、p21和p53表達(dá)的影響。 結(jié)果:UDCA對(duì)HepG2,BEL7402細(xì)胞株生長(zhǎng)的抑制作用隨藥物濃度增高而增強(qiáng)(r2=0.96,P<0.01;r2=0.97,P<0.01;48h)。UDCA對(duì)HepG2及BEL7402的IC50分別為0.92mmol.L-1,0.86mmol.L-1。UDCA(1.0mmol.L-1

3、)對(duì)HepG2及BEL7402的凋亡率分別為42±6%及44±4%,明顯高于對(duì)照組(P<0.01),并且阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)顯示:以UDCA(0.8mmol.L-1)處理HepG2后bcl-2表達(dá)由24.3±2.4%降低為10.1±1.6%,Bax表達(dá)由43±5%升高為59±3%(P<0.01);處理BEL7402細(xì)胞后bcl-2表達(dá)由21.6±1.8%降為11.6±2.1%,Bax表達(dá)由44±4%升高為59±3

4、%(P<0.01)。RT-PCR結(jié)果表明:UDCA可以上調(diào)HepG2,BEL7402細(xì)胞baxmRNA的水平,下調(diào)HepG2,BEL7402細(xì)胞bcl-2、c-myc、N-rasmRNA的水平。Westernblot實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示:UDCA可以提高HepG2,BEL7402細(xì)胞p21和p53的基因表達(dá)水平。當(dāng)UDCA濃度大于等于0.8mmol.L-1時(shí),可以導(dǎo)致HepG2,BEL7402細(xì)胞在DNA凝膠電泳圖譜上出現(xiàn)典型的DNA梯狀圖譜。

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