尿酸、尿素對HK2-細胞凋亡、纖維化相關(guān)因子表達的影響及前列地爾的干預研究.pdf

1、第一部分尿酸對人腎小管上皮細胞的凋亡、纖維化相關(guān)因子表達的影響及PGE1干預的體外研究
　　 目的:研究尿酸對人腎小管上皮細胞凋亡、纖維化相關(guān)因子表達的影響以及PGE1的干預作用。
　　 方法:①培養(yǎng)HK-2細胞;②不同濃度的尿酸刺激HK-2細胞24h、48h、72h,用MTT比色法檢測細胞活性抑制率;不同濃度尿酸培養(yǎng)HK-2細胞24h,用Annexin V.FITC/PI流式細胞檢測凋亡及檢測NAG酶的釋放量,來觀察尿

2、酸對HK-2細胞的毒性作用;通過Western Blot和Real-Time PCR檢測TGF-β1、CTGF、FN的表達,觀察尿酸對HK-2細胞的促纖維化作用;并加入PGE1了解其對HK-2細胞的保護作用。
　　 結(jié)果:①HK-2細胞加入不同濃度的尿酸分別作用24h、48h、72h后,與對照組比較,細胞活性抑制率明顯升高,并呈時間劑量依賴性。尿酸作用HK-2細胞24h后,與對照組比較,細胞凋亡率呈劑量依賴性增加至56.06％±

3、4.937％,NAG酶釋放量也呈劑量依賴性增加至15.23±0.617。800umol/L尿酸組加入PGE1后,與800umol/L尿酸組比較,細胞活性抑制率下降明顯,細胞凋亡率也明顯降低至41.61％±4.149％,NAG酶釋放量明顯減少至11.24±0.468。②.用不同濃度的尿酸作用HK-2細胞24h后,用Western Blot和Real-Time PCR檢測TGF-β1、CTGF、FN的表達,與對照組比較,TGF-β1、CTG

4、F、FN的表達量均明顯增加,并呈劑量依賴性。加入PGE1后,與單純尿酸組比較,TGF-β1、CTGF、FN表達量下降明顯。
　　 結(jié)論:①尿酸抑制HK-2細胞增殖和促進凋亡,增加NAG酶的釋放;②尿酸促HK-2細胞纖維化相關(guān)因子的表達;③PGE1能降低尿酸所致HK-2細胞凋亡,降低尿酸誘導纖維化相關(guān)因子在HK-2細胞中的表達。
　　 第二部分尿素對人腎小管上皮細胞的凋亡、纖維化相關(guān)因子表達的影響及PGE1干預的體外研究<

5、br>　　 目的:研究尿素對人腎小管上皮細胞的凋亡、纖維化相關(guān)因子表達的影響以及PGE1的干預作用。
　　 方法:①.培養(yǎng)HK-2細胞;②.不同濃度的尿素刺激HK-2細胞24h、48h、72h,用MTT比色法檢測細胞活性抑制率;用不同濃度尿素培養(yǎng)HK-2細胞24h,檢測NAG酶的釋放量及Annexin V.FITC/PI流式細胞檢測凋亡來觀察尿素對HK-2細胞的毒性作用;通過Western Blot和Real-Time PCR

6、檢測TGF-β1、CTGF、FN的表達,觀察尿素對HK-2細胞的促纖維化作用;并加入PGE1了解其對HK-2細胞的保護作用。
　　 結(jié)果:①.HK-2細胞加入不同濃度的尿素分別作用24h、48h、72h后,與對照組比較,細胞活性抑制率明顯升高,呈劑量依賴性。尿素作用HK-2細胞24h后,與對照組比較,NAG酶釋放量呈劑量依賴性增加至14.23±0.750,細胞凋亡率也呈劑量依賴性增加至42.97％±3.012％;160mmol/

7、L尿素組加入PGE1后,與160mmol/L尿素組比較,細胞活性抑制率下降明顯,NAG酶釋放量明顯減少至10.603±0.698,細胞凋亡率也明顯降低至35.31％±2.308％,均有顯著性差異;②.用不同濃度的尿素作用HK-2細胞24h后,用WesternBlot和Real-Time PCR檢測TGF-β1、CTGF、FN的表達,與對照組比較,TGF-β1、CTGF、FN的表達量均明顯增加,并呈劑量依賴性。加入PGE1后,與單純尿素組