復方苦參在人γδT細胞對胃癌細胞殺傷作用中的影響及其機制的研究.pdf

1、目的:探討復方苦參在人γδT細胞對胃癌細胞SGC-7901殺傷作用中的影響及其機制的研究。
　　 方法:
　　 一.體外異戊烯焦磷酸法（IPP）培養(yǎng)人γδT細胞，使用不同濃度的復方苦參誘導γδT細胞24小時，四甲基偶氮唑藍比色法（MTT）、流式細胞術(shù)（FCM）檢測復方苦參作用前后人γδT細胞和SGC-7901的增殖、凋亡、及γδT細胞對NKG2D表達的變化，乳酸脫氫酶（LDH）法檢測人γδT細胞殺傷活性的變化。
　

2、　 二.MEK阻斷劑PD98059誘導γδT細胞一小時后，加入不同濃度的復方苦參共培養(yǎng)24小時，同時設對照組（不加PD98059誘導，即復方苦參和γδT細胞共培養(yǎng)24小時），MTT法檢測PD98059干預對復方苦參促進γδT細胞增殖的影響，Western-Blot法檢測各組ERK1/2、p-ERK1/2表達的差異。
　　 結(jié)果:
　　 一 .MTT法檢測結(jié)果顯示
　　 1.不同濃度的復方苦參對γδT細胞生長的影

3、響與對照組比較、當復方苦參濃度在1：12.5—1：25時，能夠抑制γδT細胞的增殖，濃度在1：50—1：800時γδT細胞的增值率與對照組比較能夠顯著促進γδT細胞的增殖，且隨著復方苦參濃度的降低，γδT細胞的增殖率逐漸增強，于1：400時增殖率達峰值，當濃度>1：800時，γδT細胞的增殖率逐漸降低。
　　 2.不同濃度的復方苦參對胃癌細胞SGC-7901生長的影響不同濃度的復方苦參作用SGC-7901后其抑制率與對照組比較有

4、顯著差異且隨著復方苦參濃度的降低，其抑制率逐漸降低，于1：800時其作用明顯減弱。
　　 3.PD98059干預對γδT細胞生長的影響在PD98059+復方苦參組與對照組比較，γδT細胞的生長抑制率均明顯增高，有統(tǒng)計學意義，而復方苦參組能夠明顯促進γδT細胞的增殖。
　　 二 .LDH檢測結(jié)果顯示:復方苦參作用γδT細胞24小時后與對照組比較能夠明顯增強γδT細胞對胃癌細胞的殺傷活性（89.87±3.31vs67.35±

5、2.85），復方苦參濃度在1：50—1：400時，γδT細胞的殺傷活性隨著濃度的遞減而增強，在1：400時，γδT細胞對胃癌細胞株的殺傷活性最強，復方苦參作用SGC-7901與對照組比較，也能夠明顯增強γδT細胞對其的殺傷活性，但各濃度組之間無明顯差異。
　　 三. FCM檢測結(jié)果顯示
　　 1.不同濃度的復方苦參分別作用γδT細胞和胃癌細胞株24小時后，其在各個濃度，γδT細胞和SGC-7901的凋亡率與對照組比較均有

6、統(tǒng)計學意義(p<0.05)，且γδT細胞的凋亡率明顯低于胃癌細胞株的凋亡率（4.64％±0.23 vs 49.23±2.30，p<0.05）
　　 2復方苦參作用后的γδT細胞表達NKG2D的水平明顯高于對照組（78.32±2.83vs57.34±2.87）。
　　 四.Western-Blot法檢測結(jié)果顯示：復方苦參組與對照組、PD98059+復方苦參組比較，ERK1/2無明顯變化、p-ERK1/2表達明顯增多，有統(tǒng)計