蛇床子素抑制異丙腎上腺素誘導(dǎo)小鼠心肌纖維化及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 觀察蛇床子素抑制異丙腎上腺素誘導(dǎo)小鼠心肌纖維化（myocardialfibrosis，MF）的作用，并探討其可能的作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)選用昆明種小鼠，隨機(jī)分為溶媒對照組、MF模型組、蛇床子素80、40mg/kg兩個(gè)劑量組及陽性藥卡托普利（25mg/kg）組。預(yù)先給藥3天后，給藥組和模型組皮下注射異丙腎上腺素(isoprenaline，ISO)5mg/kg1天，后以2.5mg/kg

2、維持至30天。停止注射ISO后，給藥組繼續(xù)給藥1周。取心臟，稱重，計(jì)算全心重/體重指數(shù)(cardiacweightindex，CWI);取心室進(jìn)行HE染色和Masson染色，觀察MF的程度以及膠原分布情況，計(jì)算心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(collagenvolumefraction，CVF);用消化法測定心肌組織中羥脯氨酸(Hydroxyproline，Hydro)含量；采用RT-PCR法觀察左心室過氧化物酶體增殖物激活受體α/γ(peroxis

3、omeproliferator-activatedreceptorα/γ，PPARα/γ)，轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF-β1)，基質(zhì)金屬蛋白酶-2/9(matrixmetalloproteinase，MMP-2/9)的基因表達(dá)；免疫組化法觀察左心室核轉(zhuǎn)錄因子-κB-p65(nuclearfactorκB-p65，NF-κB-p65)，TGF-β1和MMP-9的蛋白表達(dá)。
　　

4、 體外實(shí)驗(yàn)采用原代培養(yǎng)小鼠心肌成纖維細(xì)胞（cardiacfibroblasts，CFs），應(yīng)用血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)10-6mol/L刺激CFs增殖，用RT-PCR法觀察蛇床子素(2.5～20μg/ml)對CFs中PPARα/γ，TGF-β1和MMP-2/9基因表達(dá)的影響；WesternBlot方法觀察蛇床子素對CFs中NF-κB-p65和TGF-β1蛋白表達(dá)的影響；并采用PPARα/γ拮抗劑預(yù)處理細(xì)胞，進(jìn)一

5、步觀察蛇床子素對AngⅡ刺激的CFs中TGF-β1和MMP-2/9基因表達(dá)以及NF-κB-p65和TGF-β1蛋白表達(dá)的改變。
　　 結(jié)果：
　　 在整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，蛇床子素給藥組與模型組比較能降低CWI和心肌組織中Hydro含量（P＜0.05或P＜0.01）。HE和Masson染色結(jié)果顯示，蛇床子素給藥組心肌細(xì)胞間的膠原含量明顯減少，CVF明顯下降(P＜0.01)。RT-PCR結(jié)果顯示，蛇床子素可明顯增加MF小鼠心肌中

6、PPARα/γ（P＜0.05或P＜0.01）和MMP-2/9mRNA表達(dá)（P＜0.01），明顯降低TGF-β1mRNA表達(dá)（P＜0.05或P＜0.01）。免疫組化結(jié)果顯示，蛇床子素可明顯降低MF小鼠心肌NF-κB-p65和TGF-β1的蛋白表達(dá)，增加心肌MMP-9的蛋白表達(dá)(p＜0.01)。
　　 在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，RT-PCR和WesternBlot結(jié)果顯示，應(yīng)用AngⅡ刺激CFs增殖后，蛇床子素可上調(diào)CFs中PPARα/γ和MM

7、P-2/9mRNA表達(dá)(P＜0.01)，下調(diào)TGF-β1mRNA表達(dá)（P＜0.01），同時(shí)降低NF-κB-p65和TGF-β1的蛋白表達(dá)(P＜0.05或P＜0.01)。而且在預(yù)先采用PPARα/γ拮抗劑處理細(xì)胞后，蛇床子素對增殖的CFs中MMP-2/9mRNA的上調(diào)作用被減弱（P＜0.05或P＜0.01），對TGF-β1mRNA以及NF-κB-p65和TGF-β1蛋白表達(dá)的抑制作用也被減弱（P＜0.05或P＜0.01）。