MSCs通過Gas6-Axl信號(hào)介導(dǎo)的接觸效應(yīng)保護(hù)胰島移植物.pdf

1、目的：探索間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）在體內(nèi)外對(duì)同系胰島移植物的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　方法：將鏈脲佐菌素（Streptozocin,STZ）誘導(dǎo)的糖尿病小鼠隨機(jī)分為4組接受腎包膜下移植手術(shù)：（1）MSCs對(duì)照組，接受1×106個(gè) MSCs移植；（2）胰島(Islets)對(duì)照組，接受300個(gè)胰島當(dāng)量（Islet Equivalents, IEQ）移植；（3）MSCs與Islets共移植組，

2、接受1×106個(gè) MSCs和300個(gè)IEQ共移植。術(shù)后1、2、3、5、7、14、28天，檢測(cè)血糖值；術(shù)后28天行左腎切除術(shù)，24h后檢測(cè)血糖值；術(shù)后1、7、28天獲取含胰島移植物的腎組織行胰島素免疫熒光染色。體外培養(yǎng)、擴(kuò)增MSCs，將其分為MSCs對(duì)照組和LPS處理組，培養(yǎng)第3天以Western Blot實(shí)驗(yàn)和激光共聚焦實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Gas6的表達(dá)。體外擴(kuò)增小鼠胰島β細(xì)胞系，將其分為胰島β細(xì)胞對(duì)照組和LPS處理組，第3天收集細(xì)胞，以Weste

3、rn Blot實(shí)驗(yàn)和激光共聚焦實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Axl的表達(dá)。體外將提取的胰島按如下分組：（a）Islets對(duì)照組，單獨(dú)培養(yǎng)胰島；（b）MSCs對(duì)照組，單獨(dú)培養(yǎng)MSCs；（c）MSCs與Islets接觸共培養(yǎng)組；（d）MSCs與Islets非接觸共培養(yǎng)組，通過 Transwell裝置避免兩者直接接觸；(e） Islets+Gas6共培養(yǎng)組；（f）Islets+Gas6+Fc-Axl共培養(yǎng)組。3天后，行吖啶橙（Acridineorange,AO）/

4、碘化丙啶（Propidum Iodide,PI）染色檢測(cè)胰島活性，行葡萄糖刺激胰島素分泌實(shí)驗(yàn)（Glucose-stimulated insulin secretion,GSIS）檢測(cè)胰島功能。
　　結(jié)果：移植術(shù)后，MSCs對(duì)照組的糖尿病小鼠血糖水平無明顯下降，Islets對(duì)照組血糖有改善但無法逆轉(zhuǎn)糖尿病，MSCs與Islets共移植組逆轉(zhuǎn)糖尿病，移植側(cè)腎臟切除后，受者小鼠血糖均回升至術(shù)前水平。免疫熒光染色顯示，Islets對(duì)照組及

5、MSCs與Islets共移植組小鼠的腎包膜下胰島移植物Insulin染色陽性。激光共聚焦檢測(cè)結(jié)果顯示MSCs陽性表達(dá)Gas6，胰島β細(xì)胞陽性表達(dá)Axl。Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示，比較對(duì)照組，LPS處理組的MSCs高表達(dá)Gas6，LPS處理組的β細(xì)胞高表達(dá)Axl。AO/PI活性染色檢測(cè)顯示，Islets對(duì)照組、MSCs與Islets非接觸共培養(yǎng)組、MSCs與Islets接觸共培養(yǎng)組，3組的胰島活性依次增強(qiáng)；比較Islets對(duì)照

6、組，Islets+Gas6共培養(yǎng)組的胰島活性明顯改善，Islets+Gas6+Fc-Axl共培養(yǎng)組的胰島活力無改善。GSIS實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Islets對(duì)照組、MSCs與Islets非接觸共培養(yǎng)組、MSCs與Islets接觸共培養(yǎng)組，3組胰島素分泌量依次增強(qiáng)；比較Islets對(duì)照組，Islets+Gas6共培養(yǎng)組的胰島素分泌量增加，Islets+Gas6+Fc-Axl共培養(yǎng)組的胰島素分泌量無改變。
　　結(jié)論：MSCs在體內(nèi)外均可改善