miR-1介導Notch信號通路調控大鼠MSCs向心肌樣細胞分化的研究.pdf

1、目的和意義：
　　 移植骨髓間充質干細胞(Mesenchymalstemcells，MSCs)治療缺血性心肌病已成為一大熱點。研究表明肌特異性miR-1在調控細胞肌分化方面起著關鍵作用。Notch信號通路參與調控眾多細胞生命過程，包括細胞增殖、凋亡和分化。有報道Notch信號通路與miRNAs之間相互作用，miRNAs調控Notch信號通路發(fā)揮生物學作用?；诖?，我們假設轉導miR-1至大鼠MSCs內并調控Notch信號通路來促

2、進MSCs分化為心肌樣細胞，為缺血性心肌病的細胞治療提供可能。
　　 方法：
　　 采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法從大鼠骨髓中獲得MSCs并觀察細胞形態(tài)，流式細胞學鑒定MSCs；同時合成攜帶GFP過表達miR-1慢病毒轉導系統(tǒng)(MSCsmiR-1)，對照組只攜帶GFP；將過表達miR-1慢病毒系統(tǒng)轉導大鼠MSCs并培養(yǎng)15天，光鏡下觀察轉導后細胞形態(tài)變化；在第0、4、6、15天qRT-PCR檢測miR-1、心肌相關基因GATA-4

3、、α-actin、cTnI和Connexin43(Cx43)及Notch信號通路相關基因mRNA的表達變化；免疫熒光觀察cTnI和Cx43的表達；Westernblotting檢測α-actin的蛋白表達。
　　 結果：
　　 原代細胞呈長梭形、漩渦狀生長，流式細胞學檢測結果顯示98％以上細胞表達CD44和CD29，1％以下表達CD45；與對照組相比，MSCsmiR-1組的miR-1的含量明顯增高；轉導miR-1后，MS

4、CsmiR-1組高表達心肌相關基因：包括GATA-4、α-actin、cTnI和Cx43；轉染4天后免疫熒光即可檢測cTnI和Cx43在MSCsmiR-1組的一些細胞中表達，并在第15天時表達最強；Westernblotting更進一步證實了α-actin在MSCsmiR-1組中的表達。觀察轉導前后Notch信號通路基因的mRNA水平變化發(fā)現，miR-1通過調控配體Jagged1來促進分化；Jagged1的mRNA水平下調負性調控MSC

5、s的肌細胞分化過程，同時我們觀察到了Notch1、Notch3和Hey2的mRNA水平下調，這說明，miR-1促進的肌分化過程伴隨著Notch信號通路的Jagged1-Notch1/Notch3-Hey2mRNA水平的顯著下調Jagged1-Notch1/Notch3-Hey2是肌分化過程中Notch信號通路的關鍵因子，這也許可以用來調控干細胞命運。
　　 結論：
　　 轉導miR-1至大鼠MSCs中可促使其向心肌樣細胞