乙肝病毒X蛋白通過激活c-myc誘導(dǎo)肝卵圓細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、研究背景:
　　肝癌目前已經(jīng)成了嚴(yán)重威脅人類健康和生命的重大疾病。由于肝癌有起病隱匿、發(fā)展快等特點(diǎn),很多臨床確診患者已屬晚期。因此,深入探討肝癌發(fā)生及發(fā)展的原因已經(jīng)成為了醫(yī)學(xué)上的熱門方向。我們前期的研究已經(jīng)證實(shí)了乙型肝炎病毒X蛋白可以誘導(dǎo)肝卵圓細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化,那么HBx蛋白又是如何引起肝卵圓細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化,聯(lián)系兩者之間的“橋梁”又是什么,這已經(jīng)成為我們一個(gè)亟需解決的問題。
　　目的:
　　研究HBx蛋白對(duì)c-myc表達(dá)

2、的影響;探討c-myc特異性siRNA對(duì)乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis B virus X, HBx)誘導(dǎo)卵圓細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的影響。
　　方法:
　　通過HEK293T細(xì)胞擴(kuò)增腺病毒獲得高滴度的Ad-EGFP和Ad-HBx,分別感染肝卵圓細(xì)胞株WB-F344細(xì)胞,獲得穩(wěn)定表達(dá)HBx的WB-F344-HBx細(xì)胞,通過RT-PCR和Western blot檢測其與對(duì)照組WB-F344-Mock和WB-F344-EGFP兩組

3、細(xì)胞的c-myc的表達(dá)的差異,驗(yàn)證 HBx蛋白對(duì) c-myc表達(dá)的影響。應(yīng)用特異性對(duì)應(yīng) c-myc基因的siRNA轉(zhuǎn)染各組細(xì)胞,運(yùn)用體外成瘤法、流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞遷移等實(shí)驗(yàn),觀察 c-myc特異性siRNA對(duì)HBx誘導(dǎo)卵圓細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的影響。
　　結(jié)果:
　　與轉(zhuǎn)染了空白對(duì)照組WB-F344-Mock和WB-F344-EGFP的細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染了HBx的實(shí)驗(yàn)組WB-F344-HBx,細(xì)胞中的c-myc在RNA及蛋白水平的表達(dá)明顯

4、增高。細(xì)胞在 c-myc基因沉默前,WB-F344-HBx細(xì)胞 G0/G1期細(xì)胞比例顯著降低、S期細(xì)胞比例顯著升高;第1d3組細(xì)胞都以單細(xì)胞形式懸浮生長,隨著時(shí)間延長, WB-F344-HBx細(xì)胞逐漸形成致密的細(xì)胞球體并且數(shù)量逐漸增多、體積逐漸增大;WB-F344-HBx細(xì)胞的遷移能力顯著高于對(duì)照組,WB-F344-Mock和 WB-F344-EGFP組之間各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯差異;而c-myc基因沉默后,WB-F344-Mock、WB-F