植物乳桿菌合成胞外多糖的初步研究.pdf

1、發(fā)酵乳具有對(duì)人體健康有益的生理特性，這種特性與乳酸菌的細(xì)胞壁成分特別是胞外多糖有關(guān)，很多具有保健功能的發(fā)酵制品都利用了產(chǎn)胞外多糖的菌株，這其中就包括起源于高加索山脈的傳統(tǒng)乳制品Kefir，它由共生體系Kefir粒中的細(xì)菌和酵母菌發(fā)酵而得，是一種天然的益生乳品。體外和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已經(jīng)表明Kefir及其成分具有多種生物活性。乳酸菌胞外多糖是乳酸菌在生長(zhǎng)代謝過(guò)程中分泌到細(xì)胞壁外的一種糖類化合物。許多研究表明，乳酸菌胞外多糖對(duì)人體有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)

2、、降膽固醇等多種作用。
　　 本文以Kefir粒為研究對(duì)象，旨在開(kāi)發(fā)新型產(chǎn)胞外多糖的酸奶生產(chǎn)菌株。通過(guò)對(duì)分離自Kefir粒的10株菌在不同培養(yǎng)基中胞外多糖的合成量的比較研究，確定了KF5為研究的初始菌株，確定培養(yǎng)基為以乳清粉為原料的乳清培養(yǎng)基1，采用苯酚-硫酸法測(cè)得其胞外多糖產(chǎn)量為49.32 mg/L。形態(tài)學(xué)和生理生化特征初步確定該菌株為植物乳桿菌。
　　 比較了不同培養(yǎng)條件，包括培養(yǎng)方式、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)基初始pH值及接

3、種量對(duì)KF5合成胞外多糖的影響，并在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)之上對(duì)培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)基初始pH值及接種量進(jìn)行了L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，在37℃有氧培養(yǎng)情況下確定最佳培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)時(shí)間30 h，培養(yǎng)基初始pH6.3，接種量3％。培養(yǎng)基初始pH和接種量對(duì)EPS的合成影響不顯著，培養(yǎng)時(shí)間影響顯著(p<0.05)。在最優(yōu)組合條件下，KF5胞外多糖合成量達(dá)到95.58 mg/L，比未優(yōu)化前提高了26.48％。
　　 乳酸菌胞外多糖的分離純化的條件是將

4、發(fā)酵液加熱30 min，離心后加入三倍體積的95％7，醇，4℃條件下沉淀36 h。三氯乙酸沉淀法比Sevag法更適于用來(lái)初步純化胞外多糖，最佳三氯乙酸濃度為8％。除蛋白后即得到EPS粗品。傅立葉紅外光譜分析表明菌株KF5所產(chǎn)胞外多糖是吡喃糖類大分子物質(zhì)，主要含α-型糖苷鍵。薄層色譜和氣相色譜分析結(jié)果表明該胞外多糖是由甘露糖、葡萄糖和半乳糖組成，摩爾比為1:1.46:1.43。原子粒顯微鏡觀察結(jié)果顯示KF5所產(chǎn)胞外多糖水溶液沉積物的形貌圖