植物乳桿菌C88胞外多糖的結(jié)構(gòu)分析及生物合成基因的克隆.pdf

1、乳酸菌胞外多糖對(duì)改善發(fā)酵乳制品的理化性質(zhì)至關(guān)重要。它被公認(rèn)為是食用安全性的天然增稠劑，能顯著改善發(fā)酵乳制品的粘性、質(zhì)地和口感等，具有廣闊的應(yīng)用前景。為了進(jìn)一步了解乳酸菌胞外多糖的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系及更好的調(diào)控胞外多糖的生物合成，本研究對(duì)一株分離自?xún)?nèi)蒙古傳統(tǒng)發(fā)酵乳制品的植物乳桿菌C88胞外多糖進(jìn)行了分離純化和結(jié)構(gòu)分析，并對(duì)胞外多糖生物合成基因進(jìn)行了克隆、鑒定和生物信息學(xué)分析。研究結(jié)果如下：
　　 通過(guò)基于負(fù)染法的乳酸茵莢膜多糖快速染

2、色鏡檢技術(shù)及改進(jìn)的莢膜多糖透射電鏡分析方法，觀察了植物乳桿菌C88產(chǎn)莢膜多糖。通過(guò)繪制發(fā)酵曲線和多糖含量測(cè)定，證明了植物乳桿菌C88為同時(shí)產(chǎn)黏液多糖和莢膜多糖的菌株?！?br>　　 采用乙醇沉淀、DEAE-纖維素離子交換柱層析和Sepharose CL-6B分子篩層析法從植物乳桿菌C88半合成培養(yǎng)基（Semi-defined medium，SDM）中分離純化得到一種均一組分的胞外多糖。采用離子色譜和紅外光譜法對(duì)其單糖組成和結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步

3、分析，結(jié)果表明，植物乳桿菌C88胞外多糖主要由半乳糖和葡萄糖兩種單糖組成，其物質(zhì)的量比為1:2。凝膠過(guò)濾層析法分析了胞外多糖的分子量為1.15xl06Da。并對(duì)植物乳桿菌C88胞外多糖進(jìn)行化學(xué)修飾，獲得了其硫酸化和磷酸化衍生物。
　　 根據(jù)已經(jīng)報(bào)道的乳酸菌胞外多糖合成相關(guān)基因的保守性和同源性，選擇調(diào)控胞外多糖生物合成關(guān)鍵酶基因的保守區(qū)域，設(shè)計(jì)PCR引物，擴(kuò)增了植物乳桿菌C88磷蛋白磷酸酶基因（wzb）和CPS4A基因序列。并通過(guò)