黑螞蟻纖溶活性蛋白的分離純化及其性質(zhì)研究.pdf

1、螞蟻種類(lèi)繁多，數(shù)量龐大，分布廣泛，資源豐富，是世界最龐大和最興旺的昆蟲(chóng)之一，而且歷史悠久，據(jù)統(tǒng)計(jì)已存在地球長(zhǎng)達(dá)1億年。其具有生命力強(qiáng)，壽命長(zhǎng)、營(yíng)養(yǎng)豐富等特點(diǎn)。其中蛋白質(zhì)含量極高，且含有多種人體所必需的氨基酸、微量元素和礦物質(zhì)。因此，螞蟻不僅具有較高的食用和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，而且具有極為獨(dú)特的保健和藥用價(jià)值，越來(lái)越受到人們的青睞。隨著社會(huì)和經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，螞蟻的食用價(jià)值和藥用價(jià)值也不斷的被開(kāi)發(fā)，應(yīng)用前景十分廣闊。
　　本文首次從干黑螞蟻體內(nèi)

2、分離純化得到1種纖溶活性蛋白，并對(duì)此蛋白的一些性質(zhì)進(jìn)行了初步的研究。采用硫酸銨逐級(jí)鹽析法對(duì)其蛋白質(zhì)進(jìn)行提取分離，并利用DEAE-52纖維素離子交換層析和Sephacryl S-100葡聚糖凝膠過(guò)濾層析柱對(duì)分離所得的黑螞蟻的蛋白粗提液進(jìn)行純化，經(jīng)SDS凝膠電泳檢測(cè)，得到相對(duì)分子質(zhì)量約為25kD的多肽單鏈。經(jīng)纖溶活性平板法檢測(cè)，該蛋白硫酸銨鹽析最佳飽和度濃度為30％～90％，具有較強(qiáng)纖溶活性，其酶活力為101.1735U/ml，經(jīng)檢測(cè)，每克

3、黑螞蟻纖溶活性相當(dāng)于67.4552尿激酶國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)活力單位，Braford法測(cè)定蛋白濃度，經(jīng)計(jì)算可知其蛋白濃度為2.8041mg/ml，蒽酮硫酸法測(cè)定其含糖量，可測(cè)得糖含量為8.1714％，表明了該蛋白可能是一種糖蛋白。
　　本實(shí)驗(yàn)研究了不同溫度、pH值對(duì)黑螞蟻纖溶活性蛋白酶活性的影響。結(jié)果表明，該酶最適反應(yīng)溫度為45℃，說(shuō)明該蛋白耐熱性較差，pH在3.0該蛋白酶活力最高，而pH在4.0～8.0范圍內(nèi)，該酶活力基本保持穩(wěn)定;

4、　　此外，本實(shí)驗(yàn)還研究了一系列的物化因子對(duì)目的蛋白酶活性的影響。實(shí)驗(yàn)證明:(1)Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Ba2+、Mn2+、Ca2+對(duì)該酶均有不同程度的影響，其中，Na+、K+對(duì)其酶活性影響較小，Mg2+對(duì)該酶纖溶活性有強(qiáng)烈的激活作用，而Zn2+、Ba2+、Mn2+、Ca2+等對(duì)此酶活力有明顯的抑制作用;(2)不同抑制劑、表面活性劑與變性劑對(duì)黑螞蟻纖溶活性蛋白活性的影響不同，其中紅霉素幾乎對(duì)其纖溶活性沒(méi)影響;肝素鈉對(duì)其活力的影

5、響較小;青霉素對(duì)其酶活性有較弱的促進(jìn)作用;而PMSF對(duì)其酶活性具有較強(qiáng)的抑制作用;而用β-巰基乙醇、吐溫-20、DFP、SDS則對(duì)該此酶活力有強(qiáng)抑制作用;(3)超聲破、紫外線對(duì)黑螞蟻纖溶活性蛋白活性的影響不同，其中，在超聲波作用下，隨著超聲波的頻率的增大和處理時(shí)間的延長(zhǎng)，黑螞蟻纖溶活性蛋白的酶活力明顯的下降。功率相同時(shí)，時(shí)間越長(zhǎng)，酶活性受到抑制越大，活性下降越明顯;時(shí)間相同時(shí)，功率越大，超聲波對(duì)目的蛋白的作用越強(qiáng)，酶活性抑制效果越明顯，