雷氏大疣蛛毒素纖溶酶的分離純化和生物活性測(cè)定.pdf

1、蜘蛛毒素作為天然藥物的一個(gè)新的重要來源，有著廣闊的研究前景。利用蜘蛛毒素可以治療癌癥、癲癇等疾病。
　　 本文比較了雷氏大疣蛛毒素、敬釗纓毛蛛毒素、虎紋單柄蛛毒素、海南單柄蛛毒素的體外溶纖活性，并對(duì)毒素進(jìn)行了分離純化。
　　 首先利用纖維蛋白平板法檢測(cè)四種蜘蛛毒素中除海南單柄蛛外都具有溶纖活性，比活力的測(cè)定表明雷氏大疣蛛的溶纖活性最強(qiáng)。性質(zhì)實(shí)驗(yàn)說明蜘蛛毒素溶纖活性在37℃，弱酸性時(shí)最強(qiáng)；雷氏大疣蛛毒素對(duì)新鮮雞血凝塊的溶解

2、作用較100IU的尿激酶要強(qiáng)；隨著雷氏大疣蛛毒素溶液濃度的增加，溶解人血凝塊的作用逐漸增強(qiáng)。
　　 利用反相層析分離具有體外溶纖活性的三種蜘蛛毒素，從雷氏大疣蛛毒素中分離得到了14個(gè)組分，其中4個(gè)具有溶纖活性；虎紋單柄蛛分離得了11個(gè)組分，其中1個(gè)具有溶纖活性；敬釗纓毛蛛分離得了22個(gè)組分，其中9個(gè)具有溶纖活性。雷氏大疣蛛毒素的組分2、組分10蛋白含量高，其余毒素的分離組分蛋白含量較低。另外，雷氏大疣蛛毒素的溶纖比活力高于其余兩

3、種蜘蛛毒素。因此，選擇雷氏大疣蛛毒素的分離組分2、組分10（簡稱為RATX-2、RATX-10）再進(jìn)行進(jìn)一步的分離。二次分離采用陽離子交換法，RATX-2、RATX-10各收集了2個(gè)組分，其中RATX-2-2和RATX-10-2具有溶纖活性，SDS電泳顯示單一條帶，達(dá)到了電泳純。
　　 通過比較反相層析和離子交換分離先后的不同，優(yōu)化了蜘蛛毒素的分離方法。先采用陽離子交換的方法，比較了3種pH條件對(duì)分離效果的影響，結(jié)果表明pH6.

4、0時(shí)陽離子交換效果最好，將陽離子交換所得組分再用反相層析分離，因離子交換洗脫組分鹽濃度過高，造成分離效果不是很好；若先采用反相層析的方法，再采用陽離子交換的方法，則分離效果很好。
　　 本文采用先進(jìn)的反相層析分離技術(shù)對(duì)雷氏大疣蛛毒素進(jìn)行分離純化。反相層析具有快速、高效和比較高的回收率等特點(diǎn)，所以在分離和制備上有它獨(dú)特的優(yōu)越性。國內(nèi)外在蜘蛛毒液的分離純化上大多采用這種方式。本研究采用反相層析與離子交換結(jié)合的方法，使得蜘蛛毒素得到較