不同濃度利福噴丁對兔脂肪干細胞增殖活性的影響.pdf

1、目的：探討在體外條件下不同濃度的利福噴丁溶液對兔脂肪干細胞增殖活性的影響。
　　方法：本試驗取健康新西蘭大白兔(雌雄不限)，體重2.5-3.0kg，由新疆醫(yī)科大學實驗動物中心提供。用3％戊巴比妥鈉(1 ml/kg)或速眠新(0.3 ml/kg)麻醉后，8％硫化鈉水溶液術區(qū)脫毛備皮，消毒，取肩胛間區(qū)皮下脂肪，無菌切取皮下脂肪。放入裝有10ml PBS的培養(yǎng)皿中，帶回實驗室。用I型膠原酶將細胞消化后，接種在DMEM生長液中進行培養(yǎng)。在

2、倒置顯微鏡下觀察細胞生長態(tài)勢以及形狀。待細胞增殖到一定程度時進行傳代，取第三代細胞接種后加入成骨誘導劑誘導成骨，于成骨誘導第17天鏡下觀察有鈣結節(jié)形成，茜素紅染色結果陽性，證實所取細胞為兔脂肪干細胞，然后再取第三代兔脂肪干細胞分別設3組不同利福噴丁濃度(根據(jù)每組利福噴丁濃度不同，分為10μg/ml組、20μg/ml組、40μg/ml組)及空白對照組進行細胞培養(yǎng)，采用CCK-8比色法進行增殖分化活性比較。用堿性磷酸酶及礦化結節(jié)染色鑒定成骨

3、細胞分化能力。
　　結果：堿性磷酸酶及礦化結節(jié)染色均為陽性。與空白對照組相比：利福噴丁溶液濃度為10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml時細胞增殖活性在統(tǒng)計學上無差異(P＞0.05)；在顯微鏡下可觀察到利福噴丁溶液濃度為40μg/ml時兔脂肪干細胞形態(tài)發(fā)生明顯變化。
　　結論：從兔脂肪組織中分離、培養(yǎng)出的脂肪干細胞(ADSCs)在具有在體外誘導成為成骨細胞(OB)的分化潛能。利福噴丁溶液濃度為10μg/ml、20μg/