鎮(zhèn)江地區(qū)多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌分離株耐藥的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　為了了解臨床分離的鮑曼不動(dòng)桿菌的臨床分布以及對(duì)臨床常用抗菌藥物的耐藥性;探討多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥機(jī)制，包括各種酶的降解（β-內(nèi)酰胺酶和氨基糖苷類修飾酶等），膜蛋白的突變及外排泵機(jī)制等在鮑曼不動(dòng)桿菌抗菌藥物耐藥中的作用，本文以鎮(zhèn)江地區(qū)鮑曼不動(dòng)桿菌臨床菌株為研究對(duì)象，就上述諸方面對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌多重耐藥的機(jī)制進(jìn)行了研究，以為臨床用藥提供借鑒，為多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌流行的控制提供參考。
　　方法:
　　1.采

2、用紙片擴(kuò)散法(Kirby-Bauer disc diffusion)檢測(cè)臨床分離的多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)12種常用抗菌藥物的敏感性。
　　2.通過PCR檢測(cè)β-內(nèi)酰胺類基因(TEM、ADC、OXA-23、OXA-51)和氨基糖苷類修飾酶基因(aac(3)-I、aac(6')-Ib、aph(3')-I、16S rRNA甲基化酶基因armA）;對(duì)PCR擴(kuò)增的膜蛋白CarO和巢式PCR(nested-PCR)擴(kuò)增的OprD進(jìn)行測(cè)序。

3、r>　　3.軟件Chromas用于讀序各基因序列，軟件DNAMAN連接OprD，擴(kuò)增后的CarO和OprD翻譯成氨基酸后Blast比對(duì)分析，并將OprD的序列在線遞交給Swiss-model建立三維立體結(jié)構(gòu)同源建模。
　　4.通過PCR和qRT-PCR檢測(cè)多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌和敏感鮑曼不動(dòng)桿菌的外排泵基因adeB的相對(duì)表達(dá)，同時(shí)擴(kuò)增adeABC系統(tǒng)的調(diào)控基因adeR、adeS全長(zhǎng)片段，測(cè)序。
　　結(jié)果:
　　1.鮑曼不

4、動(dòng)桿菌的藥物敏感性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)所用12種抗菌藥物的敏感性較低，耐藥性較高，有些耐藥率甚至高達(dá)100％。
　　2.實(shí)驗(yàn)菌株的β-內(nèi)酰胺類基因和氨基糖苷類修飾酶基因的陽(yáng)性率很高，其中β-內(nèi)酰胺類基因TEM、ADC、OXA-23和OXA-51的陽(yáng)性率分別為91.5％、93.6％、93.6％和95.7％，氨基糖苷類修飾酶基因aac(3)-I、aac(6')-Ib、aph(3')-I和16S rRNA甲基化酶基因armA的陽(yáng)性率分別為7

5、2.2％、72.2％、80.6％和80.6％。
　　3.多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的膜孔蛋白CarO和OprD與SDF株相比均存在相同的突變位點(diǎn)，將OprD的序列遞交Swiss-model同源建模，借助于分子可視化工具軟件Swiss-PdbViewer3.7，可直觀地觀察到由于氨基酸突變導(dǎo)致的三維立體結(jié)構(gòu)的變化。
　　4.耐藥菌株外排泵基因的adeB mRNA表達(dá)水平明顯高于敏感株，且耐藥菌株的adeR的2639位堿基發(fā)生A→G突

6、變，其對(duì)應(yīng)的219位氨基酸相應(yīng)表現(xiàn)為AAA（賴氨酸）→GAA（谷氨酸）改變，而adeS無(wú)有義突變。
　　結(jié)論:
　　1.臨床分離的多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌，除對(duì)頭孢哌酮/舒巴坦、米諾環(huán)素和氨芐西林/舒巴坦的敏感率相對(duì)較高外，對(duì)其他抗菌藥物的耐藥率均較高，有的甚至可達(dá)100％。
　　2.多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)β-內(nèi)酰類胺抗菌藥物和氨基糖苷類抗菌藥物的耐藥性與β-內(nèi)酰胺酶和氨基糖苷類修飾酶的表達(dá)有關(guān)。
　　3.多重耐藥鮑