白木香葉提取物毒理學安全性評價的實驗研究.pdf

1、目的:
　　為了進一步開發(fā)白木香葉的應用市場，根據(jù)中華人民共和國《食品安全性毒理學評價程序和方法(GB15193-2003)》的相關(guān)要求，對其提取物的急性與亞慢性毒性、遺傳毒性以及致畸性進行毒理學安全性評價，以保證白木香葉提取物的食用安全。
　　方法:
　　1.小鼠急性毒性試驗:該試驗采用最大非致死劑量法，即以30.00g/kg·bw劑量的受試物對20只健康昆明種小鼠（雌性各半）一次性經(jīng)口灌胃，連續(xù)觀察14天，記錄小鼠

2、的中毒表現(xiàn)和死亡情況
　　2.Ames試驗:采用經(jīng)鑒定符合要求的鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102菌株進行試驗。體外代謝活化系統(tǒng)采用多氯聯(lián)苯(PCB)誘導的大鼠肝微粒體酶(S-9)。試驗設(shè)五個濃度組，分別為5000μg/皿、1000μg/皿、200μg/皿、40μ g/皿、8μg/皿，同時設(shè)自發(fā)回變組、溶劑對照組和陽性突變劑對照組。每個濃度組設(shè)3個平行皿，整個試驗在相同條件下重復一次，并記錄回變菌

3、落數(shù)。
　　3.小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗:取50只健康KM小鼠（雌雄各半），采用兩次經(jīng)口灌胃法，中間間隔24小時。高、中、低劑量組分別設(shè)為10.00g/kg·bw、5.00g/kg·bw和2.50g/kg·bw。在末次灌胃白木香葉提取物后6小時用頸椎脫臼法將動物處死，每只小鼠計數(shù)200個嗜多染紅細胞，同時計數(shù)成熟紅細胞的數(shù)量，計算嗜多染紅細胞與成熟紅細胞的比值(PCE/NCE)。每只小鼠計數(shù)1000個嗜多染紅細胞進行評估，計算

4、微核發(fā)生率。
　　4.小鼠精子畸形試驗:取25只健康雄性KM小鼠，分別以劑量為10.00g/kg·bw、5.00g/kg·bw和2.50g/kg·bw的白木香葉提取物對小鼠進行經(jīng)口灌胃，每天1次，連續(xù)5天，在末次灌胃后的第30天將小鼠處死，每只小鼠計數(shù)1000個結(jié)構(gòu)完整的精子進行評估，計算畸變精子發(fā)生率。
　　5.傳統(tǒng)致畸試驗:取健康性成熟SD雌性大鼠120只，雄性大鼠60只，雌雄按1∶1同籠。分別以劑量為15.00g/kg

5、·bw、10.00g/kg·bw和5.00g/kg·bw的白木香葉提取物對受孕的大鼠于受孕的第7～16天每天灌胃，于受孕的第20天將其處死，解剖觀察孕鼠胚胎毒性指標及胎鼠生長發(fā)育指標。
　　6.大鼠90天喂養(yǎng)試驗:取80只健康SD大鼠（雌雄各半），分別設(shè)對照組和3個劑量組(即5.00g/kg·bw、10.00g/kg·bw、15.00g/kg·bw)，每組20只動物，分別用蒸餾水和不同濃度受試物灌胃染毒，每天經(jīng)口灌胃一次，連續(xù)90

6、天。分析白木香葉提取物對大鼠的體重、進食量、血液學指標、生化指標、臟器重量、臟體比的影響，同時對大鼠進行大體解剖，觀察主要臟器的組織病理學變化。
　　結(jié)果:
　　1.白木香葉提取物對昆明種雌、雄小鼠的最大耐受致死劑量(MTD)大于30.00g/kg·bw，其急性毒性屬無毒級別。
　　2.Ames試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗以及小鼠精子畸形試驗結(jié)果均為陰性，未觀察到白木香葉提取物的遺傳毒性。
　　3.各劑量組

7、的孕鼠體重增長、黃體數(shù)、著床數(shù)、活胎數(shù)、卵巢重、子宮連盤重、胎盤重，胎鼠體重、體長、尾長、死胎及吸收胎的發(fā)生率、以及胎鼠外觀、骨骼及內(nèi)臟發(fā)育等指標與對照組比較，其差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　4.白木香葉提取物90天喂養(yǎng)試驗期間，動物生長發(fā)育情況良好，各劑量組大鼠的體重、增重、食物利用率、生化指標、血常規(guī)指標、臟器重量及臟體比與對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。大體解剖和組織病理學檢查沒有發(fā)現(xiàn)明顯的由白木香