重度子癇前期患者母血、胎盤組織中CB1及FAAH的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：子癇前期(Preeclampsia，PE)是妊娠期特有的疾病，以妊娠20周后出現(xiàn)高血壓、蛋白尿為主要臨床表現(xiàn)，目前全球發(fā)病率為3-8％。該病嚴(yán)重影響母兒健康，是圍產(chǎn)期母兒病死率升高的重要原因。子癇前期患者血壓或尿蛋白水平持續(xù)升高，發(fā)生母體器官功能受損或胎兒-胎盤并發(fā)癥，進(jìn)展為重度子癇前期。目前對子癇前期進(jìn)行了大量研究，但發(fā)病機(jī)制仍不完全清楚。目前公認(rèn)的發(fā)病機(jī)制主要有：胎盤淺著床和子宮螺旋動脈血管重鑄障礙導(dǎo)致胎盤缺血缺氧，釋放多種胎

2、盤因子，促使母體的炎癥免疫反應(yīng)過度激活及血管內(nèi)皮損傷，引發(fā)高血壓、蛋白尿、凝血和肝臟功能障礙等多系統(tǒng)疾病。內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)(Endogenous cannabinoid system， ECS)由內(nèi)源性大麻素、大麻素受體、大麻素配體以及合成、降解它們的酶和運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)組成。在妊娠過程中，內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)在受精卵形成、發(fā)育、輸送、著床，子宮內(nèi)膜蛻膜化，胎盤形成及胚胎發(fā)育，分娩等方面均起到重要作用。ECS通過調(diào)節(jié)多種信號通路發(fā)揮作用，大麻素受

3、體1(CB1)與其配體內(nèi)源性大麻素(N-arachidonoylethanolamine，AEA)結(jié)合后，可抑制腺苷酸環(huán)化酶活性、激活絲裂原活化蛋白激酶、激活或抑制多種離子通道，導(dǎo)致胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞過度凋亡，侵襲能力減弱，致使胎盤形成受損。脂肪酰胺水解酶(Fatty acid amide hydrolase，F(xiàn)AAH)是內(nèi)源性大麻素AEA的主要水解酶。FAAH在胎盤組織中不可或缺，避免胚胎受高濃度AEA的損害。ECS的紊亂可能是引發(fā)重度子癇

4、前期的重要原因之一。因此，本研究通過檢測重度子癇前期患者外周血、胎盤組織中AEA、CB1和FAAH的表達(dá)情況，探討ECS在子癇前期發(fā)病機(jī)制中的作用，豐富子癇前期發(fā)病的理論依據(jù)，為疾病治療提供新的方向。
　　方法：⑴按照《妊娠期高血壓疾病診治指南（2015）》的診斷標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)選取2014年3月至2015年5月期間，在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院住院的確診為重度子癇前期患者74例作為研究組，妊娠34周以前發(fā)病為早發(fā)型重度子癇前期(Early

5、onset severe preeclampsia, EPE)，妊娠34周以后發(fā)病為晚發(fā)型重度子癇前期(Late onset severe preeclampsia, LSPE)，其中早發(fā)型重度子癇前期39例，晚發(fā)型重度子癇前期35例，并選取健康孕婦35例作為對照組。研究對象均排除慢性高血壓疾病、糖尿病、自身免疫性疾病、血液病、心臟病、嚴(yán)重肝腎病等其他妊娠合并癥，排除不良妊娠史者，排除有吸煙酗酒等不良嗜好者和近期感染病史者。⑵入組患者入

6、院后取空腹靜脈血3ml，檢測血漿中AEA、CB1及FAAH的濃度。胎盤娩出后立即取胎盤母體面近臍帶插入部，直徑約3cm內(nèi)大小約1cm×1cm×1cm的胎盤組織，避開梗死及鈣化區(qū)。生理鹽水漂洗3次后，用濾紙吸干水份，固定于10%中性福爾馬林溶液中24小時后常規(guī)脫水、浸蠟、包埋。⑶采用高效液相色譜法(High-performance liquid chromatography, HPLC)測定母血AEA濃度；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzym

7、e-linked immunosorbent assay, ELISA)測定母血CB1、FAAH濃度;采用免疫組織化學(xué)技術(shù)(Immunohistochemistry)，光學(xué)顯微鏡下觀察CB1及FAAH在胎盤組織中表達(dá)分布，并用Image pro-Plus6.0軟件進(jìn)行免疫組化圖像分析，計算平均光密度值(Mean optical density，MOD)。⑷采用SPSS16.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(?x±s)表示

8、，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)性分布、方差齊性齊，三組間均數(shù)比較采用方差分析，兩兩樣本均數(shù)間比較采用SNK(Student-Newman-Keuls)檢驗，亦稱q檢驗。若非正態(tài)或方差不齊采用非參數(shù)的秩和檢驗。兩變量之間的相互關(guān)系采用直線相關(guān)性分析，若不服從正態(tài)分布，則用Spearman秩相關(guān)。檢驗標(biāo)準(zhǔn)α=0.05，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：①重度子癇前期患者血漿中CB1濃度升高，而AEA、FAAH濃度降低，與對照組相比，差異

9、有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。EPE組母血中CB1濃度顯著高于LSPE組，且LSPE組高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.001)；EPE組母血中AEA、FAAH濃度低于LSPE組，且LSPE組低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)；②HE染色結(jié)果：光學(xué)顯微鏡下，CB1主要表達(dá)于合體滋養(yǎng)層細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞，少量表達(dá)于絨毛毛細(xì)管平滑肌細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞。FAAH主要表達(dá)于合體滋養(yǎng)層細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞，在絨毛毛細(xì)管平滑肌細(xì)胞、血管內(nèi)

10、皮細(xì)胞中未被檢測到。CB1與FAAH表達(dá)亞細(xì)胞定位于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)；③重度子癇前期患者胎盤組織中CB1平均光密度值升高，而FAAH平均光密度值降低，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。EPE組胎盤組織中CB1平均光密度顯著高于LSPE組，且LSPE組高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)；EPE組胎盤組織中FAAH平均光密度低于LSPE組，且LSPE組低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)；④CB1與FAA

11、H在母血、胎盤組織中呈負(fù)相關(guān)(r=-0.981，r=-0.795，均P<0.001)。母血中AEA濃度與CB1濃度、FAAH濃度無明顯相關(guān)性。
　　結(jié)論：⑴重度子癇前期患者母血中CB1高表達(dá)、FAAH低表達(dá)，與疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)。⑵重度子癇前期患者胎盤組織中CB1水平較正常妊娠者明顯升高，且早發(fā)組高于晚發(fā)組；FAAH水平較正常妊娠者明顯降低，且早發(fā)組低于晚發(fā)組，顯示其參與了重度子癇前期的發(fā)病，并與疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)。⑶重度子癇前期