新候選腫瘤抑制基因SLC8A2對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87的功能影響及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 SLC8A2對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87作用的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)。
　　目的:構(gòu)建過(guò)表達(dá)基因SLC8A2的U87穩(wěn)定細(xì)胞株,通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)觀察SLC8A2對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87的功能影響。
　　方法:構(gòu)建攜帶有SLC8A2全基因的慢病毒載體Lenti-SLC8A2-IRES-EGFP和陰性對(duì)照空病毒載體Lenti-EGFP,轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87,篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)靶基因及報(bào)告基因EGFP的膠質(zhì)瘤

2、細(xì)胞U87-SLC8A2(實(shí)驗(yàn)組)和僅穩(wěn)定表達(dá)EGFP的膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87-NC(陰性對(duì)照組),并分別應(yīng)用熒光定量PCR和Western blot檢測(cè)SLC8A2在各組細(xì)胞中的表達(dá);應(yīng)用Transwell小室及預(yù)鋪Matrigel基質(zhì)膠的Transwell小室檢測(cè)SLC8A2對(duì)U87細(xì)胞侵襲遷移能力的影響;應(yīng)用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)SLC8A2對(duì)U87細(xì)胞周期的影響;運(yùn)用CCK-8方法檢測(cè)SLC8A2對(duì)U87細(xì)胞增殖的影響;通過(guò)裸鼠皮下移植瘤

3、實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SLC8A2對(duì)U87細(xì)胞致瘤性的影響。
　　結(jié)果:成功構(gòu)建過(guò)表達(dá)SLC8A2的細(xì)胞株U87-SLC8A2;SLC8A2顯著抑制了U87細(xì)胞的侵襲和遷移能力,但對(duì)U87細(xì)胞的增殖及周期無(wú)顯著影響;裸鼠皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)顯示,接種U87-SLC8A2細(xì)胞的裸鼠全都不致瘤,而接種空白組與陰性對(duì)照組細(xì)胞的裸鼠全部致瘤成功。
　　結(jié)論:SLC8A2能顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87的侵襲遷移能力和裸鼠致瘤性,表明SLC8A2有可能為膠質(zhì)

4、瘤相關(guān)抑癌基因。
　　第二部分 SLC8A2抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87侵襲遷移能力的機(jī)制研究。
　　目的:進(jìn)一步探索SLC8A2抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87侵襲遷移能力的相關(guān)分子機(jī)制。
　　方法:應(yīng)用 RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞中MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MT1-MMP、uPA及uPAR轉(zhuǎn)錄水平的差異,并應(yīng)用Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞中MMP-2蛋白表達(dá)水平的差異;運(yùn)用基質(zhì)金屬蛋白酶明膠酶譜法檢測(cè)各

5、組細(xì)胞分泌至培養(yǎng)基中MMP-2酶活性的變化;應(yīng)用Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞中NF-κB、MAPK及Akt通路中相關(guān)蛋白表達(dá)水平的差異。
　　結(jié)果:與陰性對(duì)照組細(xì)胞相比,U87-SLC8A2組細(xì)胞中MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MT1-MMP、uPA及uPAR的轉(zhuǎn)錄水平及MMP-2蛋白水平被顯著下調(diào)(P<0.01),且U87-SLC8A2細(xì)胞分泌至培養(yǎng)基中的MMP-2酶活性被顯著抑制(P<0.01);與陰