圍產蒙古牛外周PMNs的GC受體信號表達及作用研究.pdf

1、試驗利用實時熒光定量PCR和Western Blot方法檢測GC特異性受體、孕酮核受體與膜受體及TLR2、TLR4和NFκB的表達，從基因和蛋白水平上探討GC介導外周PMN抑制的受體途徑與細胞效應，為闡釋GC在圍產蒙古牛免疫抑制中的作用提供新的理論證據(jù)。
　　1.圍產牛:選圍產蒙古牛3頭，于-14d，-10d，-7d，-3d，-1d，0d，1d，3 d，7d，10d，14d頸靜脈采血分離PMN。mRNA豐度分析表明，GRα、GRβ

2、、PR、PRB、mPRα、mPRβ在-14d～0d呈下降趨勢，0d后呈時間依賴性上調(P＜0.05);PGRMC1表達與圍產期GC水平呈負相關;MyD88在臨近分娩時迅速上調(P＜0.05)后下降，但維持在高于產前水平(P＜0.05);TLR2、TLR4均于產前平緩下降、產后升高;NFκB在臨近分娩階段呈上升趨勢，并維持穩(wěn)定表達。
　　2.閹牛體內注射:分別于注射DEX后0.25h、0.5h、1h、4h和8h采血分離PMN。mRN

3、A豐度分析表明:GRα、mPRβ呈時間依賴性下調(P＜0.05);mPRα、MyD88短時下調(P＜0.05)，而后維持穩(wěn)定低表達;GRβ、PRB、NFκB短時升高(P＜0.05)后降至注射前水平穩(wěn)定表達;PR、TLR2迅速降至低水平并穩(wěn)定表達(P＜0.05);PGRMC1下調(P＜0.05);短時刺激即上調TLR4(P＜0.05)并維持高表達。
　　3.體外誘導:選取4ng/mL、16ng/mLDEX，分別建立DEX、DEX+L

4、PS、DEX+RU486+LPS的PMN培養(yǎng)體系，于培養(yǎng)0.25h、0.5h、1h、4h和8h檢測基因和蛋白。mRNA豐度分析表明:4ng/mL DEX誘導GRα、GRβ、PR、PRB、mPRα、mPRβ、MyD88、TLR2和TLR4的基因表達上調(P＜0.05)，NFκB短時上調(P＜0.05)后抑制(P＜0.05);16ng/mLDEX抑制GRα、GRβ、PR、PRB、mPRβ表達(P＜0.05)，上調NFκB和TLR4(P＜0.

5、05)，而MyD88、mPRα和TLR2表達不變(P＞0.05);4ng/mL、16ng/mL DEX與LPS共培養(yǎng)后，GRα、GRβ、PR、PRB、mPRα、mPRβ、TLR2、MyD88和NFκB表達上調(P＜0.05)，4ng/mLDEX+LPS上調TLR4表達(P＜0.05)，16ng/mLDEX+ LPS其表達不變(P＜0.05);4ng/mL DEX+LPS+RU486共培養(yǎng)上調GRα、GRβ、PR、PRB、 mPRα、mP

6、Rβ、TLR2、TLR4表達(P＜0.05)，抑制MyD88表達(P＜0.05)，NFκB表達不變;16ng/mL DEX+LPS+RU486抑制PR、mPRα、mPRβ表達(P＜0.05)，上調GRβ、PRB、TLR2、TLR4、MyD88、NFκB(P＜0.05)，GRα無明顯變化;而所有處理組的PGRMC1均下調(P＜0.05)。
　　4.Western Blot檢測顯示，PMN表達GR、PR、mPRβ、PGRMC1、TLR