不同免疫狀態(tài)鮑曼不動桿菌肺炎小鼠中cDCs的變化及意義.pdf

1、背景:鮑曼不動桿菌目前已成為重癥醫(yī)學(xué)科院內(nèi)獲得性肺炎的重要機(jī)會致病菌，毒力較低，免疫力低下的重癥患者是感染的高危人群。鮑曼不動桿菌感染時機(jī)體產(chǎn)生一系列復(fù)雜的抗感染免疫應(yīng)答，感染的嚴(yán)重程度可能與機(jī)體的免疫狀態(tài)及免疫應(yīng)答水平相關(guān)，然而目前缺少免疫病理生理研究。常規(guī)樹突狀細(xì)胞(Conventional Dendritic Cells，cDCs)作為肺免疫網(wǎng)絡(luò)的前哨細(xì)胞和中心組分，在抗感染免疫應(yīng)答過程中起到重要作用，cDCs參與的免疫應(yīng)答可能與

2、鮑曼不動桿菌肺部感染的結(jié)局有關(guān)。
　　目的:探討不同免疫狀態(tài)鮑曼不動桿菌肺炎小鼠中cDCs的變化與意義。
　　方法:BALB/c小鼠隨機(jī)分為免疫力正?？瞻讓φ战M、免疫力正常感染組、免疫力低下空白對照組、免疫力低下感染組。接種鮑曼不動桿菌前4d及前1d腹腔注射環(huán)磷酰胺降低動物免疫力，以血中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)小于200×106/L作為免疫力低下的標(biāo)準(zhǔn)。50μL含108 CFU/mL鮑曼不動桿菌菌液滴鼻復(fù)制鮑曼不動桿菌肺炎小鼠模型，接種

3、鮑曼不動桿菌6h、24h分別斷頭處死小鼠，留取肺組織，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測評價肺cDCs的數(shù)量及成熟程度，ELISA檢測肺組織IFN-γ及IL-4炎癥因子水平反映炎癥反應(yīng)程度，計(jì)算肺濕干重比評價肺水腫程度，肺組織HE染色行組織病理學(xué)檢查，以炎癥細(xì)胞浸潤、間質(zhì)水腫、出血壞死、肺泡腔結(jié)構(gòu)破壞作為肺炎模型成功的標(biāo)準(zhǔn)，Smith評分反映肺損傷程度。
　　結(jié)果:(1)免疫力低下及肺炎小鼠模型建立:免疫力正常空白對照組及免疫力正常感染組6h、2

4、4h基礎(chǔ)血中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)均高于200×106/L，免疫力低下空白對照組及免疫力低下感染組6h、24h基礎(chǔ)血中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)均低于200×106/L，提示免疫力低下小鼠模型建立成功;免疫力正常感染組及免疫力低下感染組6h、24h肺組織病理均可見不同程度炎癥細(xì)胞浸潤、間質(zhì)水腫、出血壞死及肺泡腔結(jié)構(gòu)破壞，反映肺炎小鼠模型復(fù)制成功。(2)不同免疫狀態(tài)鮑曼不動桿菌肺炎小鼠中肺cDCs數(shù)量及成熟程度:與免疫力正常空白對照組6h相比，免疫力正常感染組6

5、h肺cDCs占肺單個核細(xì)胞的比例[（1.64％±0.27％）vs.（0.58％±0.12％），P＜0.05]及cDCs表達(dá)MHCⅡ占肺單個核細(xì)胞的比例[（60.68％±19.34％）vs.（41.06％±13.29％），P＜0.05]均顯著增高;免疫力低下空白對照組6h肺cDCs占肺單個核細(xì)胞的比例[（0.32％±0.18％）vs.（0.58％±0.12％），P＜0.05]明顯降低;與免疫力低下空白對照組6h相比，免疫力低下感染組6h肺

6、cDCs占肺單個核細(xì)胞的比例[（0.22％±0.09％）vs.（0.32％±0.18％），P=0.04]明顯減少，cDCs表達(dá)MHCⅡ占肺單個核細(xì)胞的比例[(44.20％±13.16％) vs.(47.84％±13.78％)，P=0.70]未見明顯增加。與免疫力正?？瞻讓φ战M24h相比，免疫力正常感染組24h肺cDCs占肺單個核細(xì)胞的比例[（1.67％±0.36％）vs.（0.61％±0.07％），P＜0.05]明顯增加，cDCs表達(dá)M

7、HCⅡ占肺單個核細(xì)胞的比例[（72.24％±16.15％）vs.（57.74％±12.02％），P=0.79]無差異;與免疫力低下空白對照組24h相比，免疫力低下感染組24h肺cDCs占肺單個核細(xì)胞的比例[（0.52％±0.24％）vs.（0.46％±0.09％），P=0.66]無差異，cDCs表達(dá)MHCⅡ占肺單個核細(xì)胞的比例[(63.08±13.11) vs.(71.60±16.41)，P=0.34]呈下降趨勢。(3)不同免疫狀態(tài)鮑曼

8、不動桿菌肺炎小鼠中肺組織炎癥因子水平:免疫力正常及免疫力低下感染組6h、24h肺組織IFN-γ及IL-4分別較免疫力正常、免疫力低下空白對照組高(P＜0.05)，提示免疫力正常及免疫力低下感染組均存在免疫炎癥反應(yīng);與免疫力正常感染組相比，免疫力低下感染組6h、24h肺組織IFN-γ水平[(17.95±2.40)ng/mL vs.(22.83±1.28)ng/mL、(14.67±2.27)ng/mL vs.(20.79±0.94)ng/m

9、L]及IL-4水平[(295.36±17.49)pg/mL vs.(332.68±14.63)pg/mL、(251.03±10.28)pg/mL vs.(321.96±14.16)pg/mL]均顯著減少(P均＜0.05)，反映免疫力正常感染組炎癥因子水平較免疫力低下感染組高。(4)不同免疫狀態(tài)鮑曼不動桿菌肺炎小鼠中肺水腫程度及Smith評分:免疫力正常及免疫力低下感染組6h、24h肺組織濕干重比分別較免疫力正常、免疫力低下空白對照組高(

10、P均＜0.05），免疫力正常感染組及免疫力低下感染組24h Smith評分[(5.02±0.70) vs.(2.66±0.15)、(8.08±0.55) vs.(2.80±0.24)]分別較免疫力正常、免疫力低下空白對照組高(P均＜0.05），提示免疫力正常感染組及免疫力低下感染組均存在不同程度肺損傷;與免疫力正常感染組24h相比，免疫力低下感染組24h肺組織濕干重比[（6.25±0.54）vs.（5.18±0.37），P＜0.05]及