通心絡(luò)對(duì)糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用及分子機(jī)制的研究.pdf

1、糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病慢性微血管并發(fā)癥之一，是一類以進(jìn)行性纖維化為病理特征的腎臟疾病，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。近期研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor，CTGF)在糖尿病腎病中可能是骨形態(tài)發(fā)生-7(bone morphor genetic p roteins-7，BMP-7)信號(hào)通路的抑制劑，兩者在腎臟纖維化過(guò)程中均發(fā)揮關(guān)鍵作用。傳統(tǒng)中藥通心絡(luò)已

2、廣泛用于心腦血管病的防治，隨著對(duì)通心絡(luò)新用途的不斷開(kāi)發(fā)，其臨床應(yīng)用也在不斷擴(kuò)大。本實(shí)驗(yàn)研究通心絡(luò)對(duì)DM大鼠腎臟中BMP-7及CTGF的影響，探討其對(duì)DN大鼠腎臟的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。
　　 目的：研究通心絡(luò)對(duì)糖尿病大鼠腎臟組織保護(hù)作用及結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)及骨形態(tài)蛋白7(BMP-7)表達(dá)的影響，并探討其對(duì)DN大鼠腎臟的保護(hù)機(jī)制。
　　 方法雄性Wistar大鼠70只，隨機(jī)選出15只作為正常對(duì)照組(C組，n=15

3、)。剩余55只采用鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)建立糖尿病大鼠模型：禁食12小時(shí)，一次性尾靜脈注射STZ55mg/kg，72h后測(cè)定血糖，以空腹血糖水平>16.7mmol/l(300mg/l)為糖尿病模型成功的標(biāo)準(zhǔn)。造模成功后大鼠隨機(jī)分為糖尿病組(DM組)，通心絡(luò)治療組(TXL組)，于24周末處死大鼠檢測(cè)各組大鼠24h尿微量蛋白、采血測(cè)空腹血糖(FPG)、糖化血紅蛋白(HbAlc)、糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)和肝腎功能等血清學(xué)指標(biāo)，腎重/體質(zhì)

4、量(KW/BW)，光鏡PAS染色，觀察腎臟病理改變及細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)含量的變化，采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reversetranscriptase coupled to polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blotting分別用于大鼠腎臟組織CTGF和BMP-7mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：1.一般指標(biāo)及血清AGEs等的變化：C組大鼠表現(xiàn)活潑，體質(zhì)量增長(zhǎng)迅速；DM組

5、大鼠出現(xiàn)多飲多食多尿及消瘦表現(xiàn)，較C組體質(zhì)量明顯下降(P<0.01)；TXL組DM組上述癥狀減輕，體質(zhì)量明顯升高(P<0.05)。DM組與C組比較，F(xiàn)PG、HbA1c,血清AGEs均明顯升高(P<0.05)；TXL組較DM組有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2.各組大鼠腎功能的變化：DM組較C組大鼠BUN、Scr、Kw/Bw升高、24h尿微量蛋白升高，表明DM組大鼠存在腎臟肥大及早期腎病表現(xiàn)。TXL組與DM組比較，24h尿

6、微量蛋白含量減少，Kw/Bw亦降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其他腎功能指標(biāo)的改變無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3.各組大鼠腎臟組織病理學(xué)觀察鏡下可見(jiàn)，C組大鼠腎小球及腎小管、間質(zhì)未見(jiàn)明顯病理改變。DM組大鼠大部分腎小球基底膜增厚，毛細(xì)血管腔受壓變窄，腎小管上皮細(xì)胞空泡樣變明顯。TXL組大鼠腎小球球囊與正常組比較無(wú)明顯增大，毛細(xì)血管叢內(nèi)可見(jiàn)清晰的血管腔，部分毛細(xì)血管叢基底膜稍增厚，系膜區(qū)稍增寬，部分腎小管上皮細(xì)胞胞漿疏松，輕度水

7、腫，未見(jiàn)空泡樣改變。4.各組大鼠腎臟組織中ECM含量的變化DM組較C組大鼠腎臟組織ECM明顯升高(P<0.01).TXL組與DM組比較，ECM含量減少(P<0.05)。5.腎組織CTGF、BMP-7mRNA的變化RT-PCR結(jié)果示，DM組較C組CTGFmRNA上調(diào)、BMP-7mRNA下調(diào)明顯(P<0.01)；TXL組較DM組CTGFmRNA下降，BMP-7mRNA上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。6.Western blot腎組織

8、CTGF、BMP-7蛋白和內(nèi)參β-actin蛋白檢測(cè)條帶光密度分析顯示：DM組腎組織CTGF表達(dá)升高、BMP-7表達(dá)降低(P<0.O1)；給藥24周后可見(jiàn)，TXL組較DM組CTGF表達(dá)下降，BMP-7表達(dá)升高(P<0.05)。
　　 結(jié)論：1、通心絡(luò)可以減輕糖尿病大鼠微量蛋白尿、改善腎臟組織病理及減少腎組織ECM含量，對(duì)DN大鼠早期具腎臟保護(hù)作用。2、通心絡(luò)抑制糖尿病大鼠腎臟組織CTGF表達(dá)，增加BMP-7表達(dá)，可能為通心絡(luò)對(duì)糖