通心絡(luò)對糖尿病大鼠腎臟的保護作用及分子機制的研究.pdf

1、糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病慢性微血管并發(fā)癥之一，是一類以進行性纖維化為病理特征的腎臟疾病，其發(fā)病機制復雜。近期研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor，CTGF)在糖尿病腎病中可能是骨形態(tài)發(fā)生-7(bone morphor genetic p roteins-7，BMP-7)信號通路的抑制劑，兩者在腎臟纖維化過程中均發(fā)揮關(guān)鍵作用。傳統(tǒng)中藥通心絡(luò)已

2、廣泛用于心腦血管病的防治，隨著對通心絡(luò)新用途的不斷開發(fā)，其臨床應(yīng)用也在不斷擴大。本實驗研究通心絡(luò)對DM大鼠腎臟中BMP-7及CTGF的影響，探討其對DN大鼠腎臟的保護作用及其可能機制。
　　 目的：研究通心絡(luò)對糖尿病大鼠腎臟組織保護作用及結(jié)締組織生長因子(CTGF)及骨形態(tài)蛋白7(BMP-7)表達的影響，并探討其對DN大鼠腎臟的保護機制。
　　 方法雄性Wistar大鼠70只，隨機選出15只作為正常對照組(C組，n=15

3、)。剩余55只采用鏈脲佐菌素(STZ)誘導建立糖尿病大鼠模型：禁食12小時，一次性尾靜脈注射STZ55mg/kg，72h后測定血糖，以空腹血糖水平>16.7mmol/l(300mg/l)為糖尿病模型成功的標準。造模成功后大鼠隨機分為糖尿病組(DM組)，通心絡(luò)治療組(TXL組)，于24周末處死大鼠檢測各組大鼠24h尿微量蛋白、采血測空腹血糖(FPG)、糖化血紅蛋白(HbAlc)、糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)和肝腎功能等血清學指標，腎重/體質(zhì)

4、量(KW/BW)，光鏡PAS染色，觀察腎臟病理改變及細胞外基質(zhì)(ECM)含量的變化，采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)(reversetranscriptase coupled to polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blotting分別用于大鼠腎臟組織CTGF和BMP-7mRNA和蛋白質(zhì)表達水平。
　　 結(jié)果：1.一般指標及血清AGEs等的變化：C組大鼠表現(xiàn)活潑，體質(zhì)量增長迅速；DM組

5、大鼠出現(xiàn)多飲多食多尿及消瘦表現(xiàn)，較C組體質(zhì)量明顯下降(P<0.01)；TXL組DM組上述癥狀減輕，體質(zhì)量明顯升高(P<0.05)。DM組與C組比較，F(xiàn)PG、HbA1c,血清AGEs均明顯升高(P<0.05)；TXL組較DM組有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。2.各組大鼠腎功能的變化：DM組較C組大鼠BUN、Scr、Kw/Bw升高、24h尿微量蛋白升高，表明DM組大鼠存在腎臟肥大及早期腎病表現(xiàn)。TXL組與DM組比較，24h尿

6、微量蛋白含量減少，Kw/Bw亦降低，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其他腎功能指標的改變無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。3.各組大鼠腎臟組織病理學觀察鏡下可見，C組大鼠腎小球及腎小管、間質(zhì)未見明顯病理改變。DM組大鼠大部分腎小球基底膜增厚，毛細血管腔受壓變窄，腎小管上皮細胞空泡樣變明顯。TXL組大鼠腎小球球囊與正常組比較無明顯增大，毛細血管叢內(nèi)可見清晰的血管腔，部分毛細血管叢基底膜稍增厚，系膜區(qū)稍增寬，部分腎小管上皮細胞胞漿疏松，輕度水

7、腫，未見空泡樣改變。4.各組大鼠腎臟組織中ECM含量的變化DM組較C組大鼠腎臟組織ECM明顯升高(P<0.01).TXL組與DM組比較，ECM含量減少(P<0.05)。5.腎組織CTGF、BMP-7mRNA的變化RT-PCR結(jié)果示，DM組較C組CTGFmRNA上調(diào)、BMP-7mRNA下調(diào)明顯(P<0.01)；TXL組較DM組CTGFmRNA下降，BMP-7mRNA上調(diào)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。6.Western blot腎組織

8、CTGF、BMP-7蛋白和內(nèi)參β-actin蛋白檢測條帶光密度分析顯示：DM組腎組織CTGF表達升高、BMP-7表達降低(P<0.O1)；給藥24周后可見，TXL組較DM組CTGF表達下降，BMP-7表達升高(P<0.05)。
　　 結(jié)論：1、通心絡(luò)可以減輕糖尿病大鼠微量蛋白尿、改善腎臟組織病理及減少腎組織ECM含量，對DN大鼠早期具腎臟保護作用。2、通心絡(luò)抑制糖尿病大鼠腎臟組織CTGF表達，增加BMP-7表達，可能為通心絡(luò)對糖