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1、目的:系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種系統(tǒng)性自身免疫性疾病,其發(fā)病與Ⅰ型干擾素通路過度活化及固有免疫應(yīng)答異常密切相關(guān)。小RNA(microRNAs,miRNAs)是近年來發(fā)現(xiàn)的能夠調(diào)節(jié)靶基因表達的一組單鏈小分子RNA,在免疫系統(tǒng)各個方面都可發(fā)揮重要的調(diào)控作用。本研究旨在鑒定SLE患者中miRNA基因的表達譜,尋找與SLE有相關(guān)性的miRNA基因,探索其在疾病中的作用及可能的作用機制。 方法:在中國漢族人群中,應(yīng)用實時熒光定量聚合酶
2、鏈反應(yīng)(Real-time PCR)技術(shù)Taqman探針方法檢測156個成熟miRNAs在SLE和正常對照組間的表達差異。并在此基礎(chǔ)上進一步擴大樣本驗證miR-146a的表達差異,同時結(jié)合臨床資料分析其與疾病表型的關(guān)系;使用Real-time PCR技術(shù)SYBR Green方法針對相同樣本檢測miR-146a靶基因IRAK1和TRAF6.及三個干擾素誘導(dǎo)基因Ly6E、MX1、OAS1mRNA的表達水平。體外運用熒光報告系統(tǒng)檢測過表達mi
3、R-146a后對IRSE報告基因活性的影響。在SLE患者PBMC中過表達miR-146a后檢測其下游干擾素誘導(dǎo)基因mRNA表達水平。 結(jié)果:對156個成熟miRNAs的表達譜鑒定,發(fā)現(xiàn)包括miR-146a在內(nèi)的42個miRNAs在SLE患者中存在表達差異。進一步擴大樣本證實miR-146a的表達水平在SLE患者中顯著低于正常對照組(P<0.0001),且降低幅度與疾病活動程度和腎臟損害程度呈負相關(guān)。miR-146a表達水平同時與
4、干擾素積分之間存在負性相關(guān),體外實驗檢測miR-146a對Ⅰ型干擾素通路激活的影響,在HEK 293T和HeLa兩個細胞系中過表達miR-146a后均可降低ISRE報告基因的活性(P<0.05)。miR-146a的兩個靶基因:IRAK1和TRAF6的表達水平在SLE患者組中顯著高于正常對照組(P=0.0002和P=0.0003),且與miR-146a表達水平呈負相關(guān)。SLE患者PBMC中過表達miR-146a后干擾素誘導(dǎo)基因mRNA的表
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