miR-150調(diào)控C-myb的表達(dá)在增生性瘢痕中的作用機制研究.pdf

1、[目的]
　　1.培養(yǎng)增生性瘢痕成纖維原代細(xì)胞用于后續(xù)研究的建立;
　　2.通過組織形態(tài)學(xué)技術(shù)觀察增生性瘢痕成纖維細(xì)胞生長及與正常皮膚組織的差異;
　　3.組織學(xué)方面:探究miR-150及其靶蛋白c-Myb在增生性瘢痕組織中的表達(dá);
　　4.細(xì)胞學(xué)方面:探究miR-150及其靶蛋白c-Myb對瘢痕成纖維細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。
　　[方法]
　　1.標(biāo)本的收集:根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)，從廣東省第二人民醫(yī)院創(chuàng)傷外科

2、、普外科收集標(biāo)本共20例。標(biāo)本的獲取均征得病人的同意，簽知情同意書。術(shù)前均未對瘢痕進(jìn)行處理治療。
　　2.將收集到的增生性瘢痕組織進(jìn)行瘢痕成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)，建立對各細(xì)胞系的命名并同時記錄相關(guān)資料，總結(jié)瘢痕成纖維細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項和方法，觀察細(xì)胞生長規(guī)律和生長特點。
　　3.通過HE染色和Masson染色了解正常皮膚組織和增生性瘢痕組織的結(jié)構(gòu)差異，為進(jìn)一步的組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)實驗做準(zhǔn)備。
　　4.組織學(xué)實驗:①利用原位雜

3、交的方法判定miR-150在瘢痕組織中的表達(dá)情況;②利用免疫組化方法判定c-Myb蛋白在瘢痕組織中的表達(dá)情況。
　　5.細(xì)胞學(xué)實驗:①將miR-150探針轉(zhuǎn)染進(jìn)入瘢痕成纖維細(xì)胞中;②利用qrt-PCR方法將細(xì)胞中的miR-150進(jìn)行擴增;③利用western-blot方法檢測擴增后的細(xì)胞中c-Myb蛋白的表達(dá)量;④顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染miR-150后的瘢痕成纖維細(xì)胞生長情況。
　　[結(jié)果]
　　1.組織學(xué)實驗結(jié)果:miR-1

4、50在增生性瘢痕的基底層高表達(dá)，而在角質(zhì)層和顆粒層低表達(dá)。c-Myb蛋白在瘢痕組織的基底層是低表達(dá)的，在角質(zhì)層和顆粒層是高表達(dá)的。
　　2.細(xì)胞學(xué)實驗結(jié)果:①本實驗成功地將miR-150轉(zhuǎn)染進(jìn)入瘢痕成纖維細(xì)胞中;②加了miR-150模擬物后，細(xì)胞內(nèi)的miR-150增多，此時western-blot結(jié)果是c-Myb蛋白表達(dá)減少;③加了miR-150抑制物后，細(xì)胞內(nèi)的miR-150減少，此時western-blot結(jié)果是c-Myb蛋白