SM22α抑制Ras激活的機制及黃芩苷的靶向干預.pdf

1、目的:血管平滑肌細胞(vascularsmoothmusclecell，VSMC)的表型轉(zhuǎn)化是高血壓、動脈粥樣硬化、血管再狹窄等血管重塑性疾病發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵因素。血小板源性生長因子(platelet-derivedgrowthfactor,PDGF)是VSMC的強效促絲裂原和趨化劑。黃芩苷(baicalin)是一種從中草藥中提取的草本衍生的黃酮類化合物。已有研究發(fā)現(xiàn)，黃芩苷具有抑制VSMC增殖的作用。平滑肌22alpha(smooth

2、muscle22alpha，SM22α)是收縮型VSMC的分化標志基因，具有抗增殖功能。Ras蛋白是原癌基因ras表達的一種小G蛋白，參與細胞生長、分化、細胞骨架、蛋白質(zhì)分泌和運輸?shù)冗^程的調(diào)節(jié)。我們前期發(fā)現(xiàn)，黃芩苷抑制PDGF-BB誘導的VSMC增殖，本研究進一步探討其作用機制。
　　 方法與結(jié)果:
　　 1.黃芩苷抑制PDGF-BB誘導的VSMC表型轉(zhuǎn)化
　　 PDGF-BB（20ng/ml）刺激VSMC24h

3、后，Westernblot結(jié)果顯示，PDGF-BB明顯促進VSMC增殖標志物PCNA的表達，抑制VSMC分化標志物SM22α、caldesmon、calponin、SMα-actin的表達。
　　 用黃芩苷預處理VSMC24h后，再用PDGF-BB刺激VSMC24h，Westernblot結(jié)果顯示，黃芩苷抑制PDGF-BB誘導的PCNA上調(diào)和分化基因SM22α、caldesmon、calponin、SMα-action下調(diào)。結(jié)果

4、提示，黃芩苷抑制PDGF-BB誘導的VSMC表型轉(zhuǎn)化。
　　 2.SM22α通過與Ras相互作用抑制PDGF-BB誘導的SOS1-Ras信號復合物形成
　　 SOS1與Ras的相互作用是Ras活化的重要步驟。用PDGF-BB刺激平滑肌細胞2min后，進行免疫沉淀分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)PDGF-BB促使SOS1與Ras的相互作用，而過表達SM22α則競爭抑制SOS1與Ras的結(jié)合。結(jié)果提示，SM22α可能通過與Ras結(jié)合而阻止SO

5、S1-Ras信號復合物的形成，進而抑制Ras活化。
　　 3.SM22α磷酸化突變體促進SOS1和Ras的相互作用
　　 免疫沉淀分析結(jié)果顯示，過表達SM22α非磷酸化突變體S181A抑制Ras與SOS1的結(jié)合，與野生型SM22α作用一致;而過表達SM22α強制磷酸化的S181D突變體，則促進Ras-SOS1復合物結(jié)合。這些結(jié)果佐證了上述發(fā)現(xiàn)。
　　 4.黃芩苷抑制球囊損傷誘導的ICAM-1和VCAM-1表達和內(nèi)

6、膜增生
　　 免疫組織化學染色結(jié)果顯示，球囊損傷14d后，與損傷組相比較，黃芩苷顯著抑制球囊損傷誘導的ICAM-1和VCAM-1表達。
　　 結(jié)論:
　　 1.黃芩苷抑制PDGF-BB誘導的VSMC由分化型向合成型轉(zhuǎn)化。
　　 2.過表達SM22α抑制PDGF-BB誘導的Ras-SOS1信號復合物的形成。
　　 3.SM22α磷酸化突變體促進SOS1-Ras信號復合物的形成。
　　 4.黃