2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、頂復門原蟲是一類專性的細胞內(nèi)寄生原蟲,包括剛地弓形蟲、隱孢子蟲、瘧原蟲、巴貝斯蟲和球蟲等,是人和動物的重要病原。這類原蟲具有相似的亞細胞結構并能分泌與入侵相關的保守蛋白,尤其是在入侵宿主細胞階段分泌的棒狀體蛋白(rhoptryproteins,ROPs)被認為是協(xié)助寄生蟲入侵和繁殖的關鍵分子。
  微小隱孢子蟲(Cryptosporidium parvum)屬專性腸道寄生性原蟲,在免疫功能正常的宿主通常是自限性的。但免疫缺陷的宿主

2、感染后,如艾滋病患者等則可能危及生命。目前,尚未見報道有效治療隱孢子蟲感染的藥物,因此,疫苗是未來防控本病的重要策略之一。
  本研究根據(jù)Cryptodb數(shù)據(jù)庫(http://cryptodb.org/cryptodb/)中登錄的微小隱孢子蟲棒狀體蛋白cgd8_2530編碼基因中的sushi結構域基因片段序列(共708bp)設計引物,利用PCR技術將該基因片段從微小隱孢子蟲基因組DNA中擴增出來,然后連接到原核表達載體pET28a

3、(+)上,構建重組表達質粒pET-sushi并轉化到大腸桿菌BL21(DE3)中進行誘導表達。結果顯示,sushi結構域基因在大腸桿菌中高效表達。將純化的重組蛋白免疫新西蘭白兔制備多克隆抗體,Western blot分析顯示重組蛋白能被微小隱孢子蟲sushi結構域基因重組表達蛋白免疫兔血清識別,表明表達的重組蛋白具有較好的反應原性和免疫原性。
  將sushi基因片段連接到pVAX1質粒,成功構建了真核重組表達質粒pVAX-sus

4、hi,與sushi亞單位疫苗共同免疫ICR小鼠,并設置健康組、空白組、TE組、pVAX1質粒組、佐劑組,對各組誘導的免疫應答指標進行了檢測比較;,觀察ICR小鼠感染泰澤隱孢子蟲(C.tyzzeri)后的免疫保護效果。結果顯示,sushi亞單位疫苗組ICR小鼠血清中特異性IgG抗體、脾臟CD4+和CD8+T淋巴細胞數(shù)量、淋巴細胞增殖及各細胞因子IFN-γ、TNF、IL-4、IL-5、IL-12p70等免疫水平均顯著增高,表明亞單位疫苗能誘

5、導小鼠產(chǎn)生Th1/Th2混合型免疫反應。減卵實驗顯示,亞單位疫苗免疫組無排卵高峰;排卵量明顯減少,減卵率可達89%,表明制備的sushi亞單位疫苗能明顯地誘導小鼠產(chǎn)生特異性免疫應答,對隱孢子蟲感染具有良好的免疫保護作用。而pVAX-sushi試驗組CD4+和CD8+T淋巴細胞的數(shù)量、淋巴細胞增殖及各細胞因子指標也呈現(xiàn)顯著升高的趨勢,可以產(chǎn)生Th1/Th2混合型細胞免疫反應,但明顯低于亞單位疫苗組;血清中特異性IgG抗體水平與其他對照組比

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