EphAl-ephrinA3在食管癌組織中的表達及其與臨床參數(shù)的關系.pdf

1、在世界范圍內，食管癌高發(fā)區(qū)包括：中國、南美、西歐、南非、日本和前蘇聯(lián)地區(qū)。90年代以來，某些危險因素得到有效的干預改善后，河南省食管癌發(fā)病率和死亡率逐漸呈緩慢下降趨勢，但還是明顯高于全國平均水平。Eph基因由于在分泌紅細胞生成素的人類肝細胞癌細胞株中高表達而被命名，是受體酪氨酸激酶基因家族中最大的一個亞群，參與細胞生長、分化、胚胎發(fā)育及細胞內信號轉遞等過程，有相當重要的生理功能。EphA1基因是受體酪氨酸激酶Eph家族中的第一個成員，位

2、于染色體7q34。ephrinA3是EphA1的主要配體之一，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在人類癌癥的EphA1表達水平是可變的，但是EphA1和ephrinA3在食管癌中的研究卻很少。
　　 目的：
　　 分析EphA1和ephrinA3mRNA的表達水平與患者的病理參數(shù)之間的關系，研究這兩個分子表達的臨床意義。在食管癌組織標本中對EphA1和ephrinA3的表達進行了蛋白水平上的檢測，并利用食管癌細胞系，初步考察了ephrinA3在

3、食管癌細胞生物學方面的功能，從不同層次和角度對ephrinA3及EphA1在食管癌中的作用，功能及臨床意義進行了研究和探討。
　　 材料與方法：
　　 1對象選擇、組織樣本的采集與患者臨床資料的收集
　　 選取2007-2008年在林州市腫瘤醫(yī)院就醫(yī)的食管癌患者為研究對象，采集術后患者食管癌原發(fā)灶及其匹配的正常食管組織有效標本92對。收集病人的臨床資料，便于統(tǒng)計分析和研究。
　　 2樣本中EphA1/ep

4、hrinA3 mRNA水平的測定
　　 采用real-time PCR測定食管癌患者癌組織及匹配正常組織中EphA1/ephrinA3基因mRNA的表達水平。
　　 3樣本中EphA1和ephrinA3蛋白表達水平的檢測及ephrinA3對食管癌細胞生長影響的測定
　　 通過Western blot和免疫組織化學染色法測定食管癌患者癌組織以及其匹配的癌旁正常組織中EphA1和ephrinA3的蛋白表達水平。在8株

5、人類食管癌細胞系中檢測ephrinA3的蛋白表達水平，最后選定ephrinA3本底表達水平最低的TE-12細胞系，構建ephrinA3的穩(wěn)定表達株。然后，通過并用MTT比色法繪制細胞生長曲線，檢測ephrinA3對食管癌細胞生長的影響。
　　 4統(tǒng)計學分析
　　 用SPSS12.0統(tǒng)計分析軟件對數(shù)據(jù)進行分析。對△(△Ct)進行配對t檢驗及相關分析。對食管癌樣本EphA1和ephrinA3基因mRNA表達水平單個臨床參數(shù)間

6、的關系采用x2檢驗，以α=0.05作為檢驗水準。
　　 結果：
　　 1熒光定量PCR結果
　　 1.1 EphA1和ephrinA3基因在食管癌組織中mRNA表達水平
　　 在92對臨床樣品中，與配對的正常食管組織相比，有82例(89.13％)食管癌組織中的EphA1表達上調，在食管癌組織中EphA1基因的mRNA的表達與正常食管組織相比有統(tǒng)計學差異(t=-6.899，P＜0.01)。
　　 有

7、53(57.61％)例食管癌組織中的ephrinA3表達上調，在食管癌組織中ephrinA3基因的mRNA的表達與正常食管組織相比有統(tǒng)計學差異(t=-2.436，P＜0.05)。
　　 1.2 EphA1和ephrinA3基因在食管癌組織中的mRNA表達與臨床參數(shù)之間多因素分析
　　 腫瘤家族史組的食管癌組織中EphA1 mRNA的表達水平顯著低于無腫瘤家族史組(x2=5.838，P＜0.05)，不同病理類型間，EphA

8、1 mRNA表達水平差異有統(tǒng)計學意義(x2=9.660,P＜0.01)。
　　 腫瘤家族史組的食管癌組織中ephrinA3 mRNA的表達水平顯著低于無腫瘤家族史組(x2=5.417，P＜0.05)，在淋巴結轉移組食管癌組織中ephrinA3 mRNA的表達水平顯著低于淋巴結未轉移組(x2=20.504，P＜0.01)，不同病理類型間，ephrinA3mRNA表達水平差異有統(tǒng)計學意義(x2=6.434，P＜0.05)。
　

9、　 2 Western Blot和免疫組化結果及EphA1和ephrinA3基因在食管癌組織中的蛋白表達與臨床參數(shù)之間多因素分析
　　 腫瘤家族史組的食管癌組織中EphA1蛋白的表達水平顯著低于無腫瘤家族史組(x2=11.482，P＜0.01);不同病理類型間，EphA1蛋白表達水平差異有統(tǒng)計學意義（x2=12.818，P＜0.01）。
　　 腫瘤家族史組的食管癌組織中ephrinA3蛋白的表達水平顯著低于無腫瘤家族史

10、組(x2=10.391，P＜0.01)，在淋巴結轉移組食管癌組織中ephrinA3蛋白的表達水平顯著低于淋巴結未轉移組（x2=13.615，P＜0.01）不同病理類型間，ephrinA3蛋白表達水平差異有統(tǒng)計學意義(x2=7.525，P＜0.05)。
　　 3人類食管癌細胞系中ephrinA3的表達情況
　　 采用Western blot方法，檢測了8株人食管癌細胞中ephrinA3的蛋白表達水平。結果顯示：TE-12，

11、Ec-9706，KYSE-180中表達水平較低。選用本底表達水平最低的TE-12細胞系構建ephrinA3的穩(wěn)定表達株，以進一步考察ephrinA3對食管癌細胞的影響。
　　 結論：
　　 1 ephrinA3和EphA1 mRNA和蛋白在食管癌組織較配對的正常食管組織表達下調。ephrinA3和EphA1 mRNA表達水平負相關，二者可能在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起協(xié)同作用。
　　 2 ephrinA3 mRNA和蛋白