人臍帶間充質干細胞移植小鼠曲細精管的免疫反應研究.pdf

1、【背景與目的】：男性不育癥是世界性的醫(yī)學難題,近年來，間充質干細胞移植被應用于男性生精功能障礙不育癥的治療中并取得一定的研究成果。人臍帶間充質干細胞（Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells，HuMSCs）因其具有高度的自我增值和多向分化潛能以及低免疫原性和獨特的免疫調節(jié)功能而逐漸成為新的間充質干細胞來源。前期研究表明HuMSCs移植到不育小鼠體內后能夠遷移和存活至少4個月，并且能夠促進其生

2、精功能的恢復，但人臍帶間充質干細胞移植睪丸后是否引發(fā)免疫排斥尚存在爭議。本實驗旨通過曲細精管顯微注射法，初步研究HuMSCs移植小鼠睪丸曲細精管后的免疫反應情況，為今后HuMSCs應用于臨床治療提供理論依據(jù)和實驗基礎。
　　【材料與方法】：（1）采用組織塊貼壁法分離、培養(yǎng)、擴增HuMSCs，取第3代生長良好的 HuMSCs以BrdU進行標記；（2）KM雄性小鼠隨機分為 HuMSCs移植組（DH：HuMSCs+含血清培養(yǎng)基）、含血清

3、培養(yǎng)基組（DM：含血清培養(yǎng)基）、293T移植組(DT：293T+含血清培養(yǎng)基)、正常對照組（NC:無處理組）；（3）通過顯微注射法將HuMSCs移植到小鼠睪丸曲細精管，移植后常規(guī)飼養(yǎng)；（4）觀察HuMSCs在曲細精管的存活、移行、分布情況；（5）于移植第2周、第3周解剖各組小鼠睪丸，通過組織病理切片觀察小鼠睪丸形態(tài)變化；（6）免疫組化法檢測睪丸巨噬細胞浸潤情況；（7）qRT-PCR及ELISA檢測睪丸炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF

4、-α、MCP-1、IFN-α、IFN-β的表達水平，了解各組免疫反應情況。
　　【結果】：（1）通過顯微注射法成功將細胞移植到小鼠睪丸曲細精管，移植1周后HuMSCs主要存在于睪丸曲細精管的官腔內，且有逐漸向基底膜移行的局勢，3周后即可觀察到細胞分布在生精上皮近基底膜處；（2）移植后DH、DT、DM組均出現(xiàn)局部免疫炎癥反應，其中DT、DM組睪丸形態(tài)明顯改變，表現(xiàn)為生精上皮損傷，生精細胞脫落，部分表現(xiàn)為“空泡樣”改變，間質增生，間質

5、中可見到明顯巨噬細胞浸潤，而DH組免疫反應輕微，表現(xiàn)為生精上皮變薄，間質輕度水腫，巨噬細胞數(shù)量無明顯增加；（3）移植第2周DH組炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1 mRNA表達水平無明顯上調，而DT、DM組炎癥因子表達水平明顯升高，與 DH組有顯著性差異（P<0.05）；（4）ELISA結果顯示移植第2周DH組睪丸炎癥因子（IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1、IFN-α、IFN-β）表達量較正常對照組輕度增加

6、，而DT、DM組炎癥因子表達量則明顯增加（p<0.05）。
　　【結論】：（1）HuMSCs移植小鼠曲細精管后能夠存活并發(fā)生遷移，3周后分布在生精上皮近基底膜處；（2）DH組（HuMSCs+含血清培養(yǎng)基組）移植小鼠曲細精管后僅引起較微弱的免疫炎癥反應，而 DT組(293T+含血清培養(yǎng)基組)免疫炎癥反應較強，證實 HuMSCs具有低免疫原性的特點；（3）DM組表現(xiàn)為強烈的免疫炎癥反應，而DH組免疫反應輕微，提示HuMSCs對含血清培