臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)CD34+祖細(xì)胞免疫反應(yīng)的影響.pdf

1、目的：探討缺氧及非缺氧臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞(UC-MSCs)是否能有效抑制臍血CD34+祖細(xì)胞免疫反應(yīng),影響其反應(yīng)過(guò)程中免疫細(xì)胞因子的分泌。
　　 方法：通過(guò)膠原酶及胰酶消化法從臍帶中分離獲得MSCs,觀察其生長(zhǎng)形態(tài),取傳代培養(yǎng)至第3代的UC-MSCs流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其表面標(biāo)志；淋巴細(xì)胞分離液分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)；免疫磁珠分離臍血CD34+祖細(xì)胞；將不同數(shù)量的第三代UC-MSCs5×103、2×104、8×101分別

2、加入臍血CD34+祖細(xì)胞、外周血單個(gè)核細(xì)胞共培養(yǎng)體系中,不加UC-MSCs的CD34+祖細(xì)胞、PBMC共培養(yǎng)體系為陰性對(duì)照；另設(shè)用Transwell懸掛式小室將UC-MSCs和臍血CD34+祖細(xì)胞、PBMC共培養(yǎng)體系分隔培養(yǎng)；培養(yǎng)96 h后,分別收集上清液,ELISA檢測(cè)IFN-γ和IL-10分泌水平。氯化鈷(COCl2)進(jìn)行化學(xué)模擬缺氧,在UC-MSCs中加入氯化鈷濃度為0、50、100、150、200、250μmol/L的細(xì)胞培養(yǎng)液

3、,分別于12h、1d、2d、3d、4d、5d、6d通過(guò)MTT法檢測(cè)各組的OD值,從而確定各組細(xì)胞的增殖情況；將氯化鉆濃度為150μmol/L的培養(yǎng)液缺氧處理臍帶MSCs48h后,加到臍血CD34+祖細(xì)胞、PBMC共培養(yǎng)體系中,培養(yǎng)96h后,收集上清液,ELISA檢測(cè)IFN-γ和IL-10分泌水平。
　　 結(jié)果：臍帶UC-MSCs高表達(dá)CD105、CD90、CD29、CD49,不表達(dá)CD40、CD80、CD86、HLA-DR、CD

4、34、CD45；加UC-MSCs組IFN-γ的分泌量減少(與陰性對(duì)照組比,P<0.05),IL-10的分泌量增多(與陰性對(duì)照組比,P〈0.05),而且具有數(shù)量依賴性,即數(shù)量越多免疫抑制作用越強(qiáng)；Transwell分隔培養(yǎng)組IFN-γ的分泌量減少(與陰性對(duì)照組相比,P〈0.05),IL-10的分泌量增多(與陰性對(duì)照組相比,P<0.05)；但與接觸培養(yǎng)組相比,IFN-γ的分泌量增多,IL-10的分泌量減少。經(jīng)氯化鈷模擬缺氧處理的UC-MSC

5、s(≤150μmol/L)其對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期提前,對(duì)數(shù)期縮短,增殖速度加快,第3天之后減慢,提前達(dá)平臺(tái)期,4～5 d后呈逐漸降低趨勢(shì),而經(jīng)較高濃度(200、250μmol/L)COCl2處理的UC-MSCs生長(zhǎng)曲線趨于低平。缺氧的臍帶MSCs能抑制共培養(yǎng)體系中淋巴細(xì)胞IFN-γ的分泌(與陰性對(duì)照組比,P<0.05),同時(shí)促進(jìn)IL-10分泌(與陰性對(duì)照組比,P<0.05),但與非缺氧臍帶MSCs組相比,IFN-v的分泌最增多,IL～10的分泌量

6、減少。
　　 結(jié)論：通過(guò)酶消化法可從臍帶中成功分離扶得MSCs；氯化鉆(濃度≤150μmol/L)對(duì)UC-MSCs增殖影響微弱,可用于其模擬缺氧預(yù)處理；缺氧/非缺氧UC-MSCs都能抑制臍mCD34+祖細(xì)胞的免疫反應(yīng)中IFN-γ的分泌,同時(shí)促進(jìn)IL-10分泌,并且這種作用部分依賴于細(xì)胞間的相互接觸；缺氧處理后的UC-MSCs免疫調(diào)節(jié)功能下調(diào)；UC-MSCs與臍血CD34+祖細(xì)胞聯(lián)合移植可有效減輕同利,異體干細(xì)胞移植后的免疫排斥反