臍帶間充質干細胞移植前細胞活性評價指標的研究.pdf

1、背景：
　　人臍帶來源間充質干細胞（humanumbilicalcordderivedmesenchymalstemcells,hUC-MSCs）憑借其組織來源廣泛、含量豐富、不受倫理限制等優(yōu)勢成為間充質干細胞的理想來源,是目前干細胞移植的熱點。UC-MSCs作為一種動態(tài)的活細胞，移植前細胞活性對治療效果的影響最為直接。目前移植前細胞活性檢測指標通常采用經典臺盼藍染色法。但是由于易受主觀因素的影響，并且其檢測針對的是細胞膜完整性，

2、僅僅是細胞生理狀態(tài)的一部分，并不能時時地準確反映細胞整體功能，從而影響對臨床應用的指導意義。因此，探尋一種可準確反映細胞功能狀態(tài)的活性指標，將會大大促進間充質干細胞在臨床疾病治療、科學研究方面的發(fā)展。
　　目的：
　　通過對多種具有代表性的細胞活性測定方法進行比較，探尋可準確反映細胞功能狀態(tài)的活性指標，篩選出一定條件下能夠真實反映移植前細胞狀態(tài)的活性指標，為UC-MSCs臨床應用提供指導。
　　方法：
　　1.體

3、外分離培養(yǎng)人臍帶間充質干細胞，細胞免疫學表型鑒定，成骨成脂誘導；
　　2.UC-MSCs的保存：0.9％氯化鈉注射液，4℃條件下保存0h、2h、4h、6h；
　　3.評估人工活性測定方法（臺盼藍法、TUNEL、Live-DeadAssay、貼壁實驗）的準確性；
　　4.采用多種具有代表性的細胞活性測定方法（臺盼藍染色法、AnnexinV-PI、TUNEL、CCK-8、Live-DeadAssay、貼壁實驗）檢測保存后細

4、胞存活率；
　　5.對細胞存活率與反應細胞功能狀態(tài)指標CFE進行相關性分析；
　　6.對貼壁實驗在不同觀察者之間的可靠性進行統(tǒng)計學分析。
　　結果：
　　1.針對0.9%生理鹽水保存不同時間點（0h、2h、4h、6h）的UC-MSCs進行活性檢測，人工檢測方法（臺盼藍染色法、TUNEL、Live-DeadAssay、貼壁實驗）之間最大測量差值大約分別是1.46%、6.89%、8.23%、8.94%，均小于10%的

5、統(tǒng)計誤差；
　　2.在UC-MSCs保存0h時，臺盼藍染色法同其它幾種經典活性測定方法（AnnexinV-PI、TUNEL、CCK-8、Live-DeadAssay、貼壁實驗）比較，結果相似，差異無統(tǒng)計學意義，而對于保存一定時間后UC-MSCs，細胞活力則具有顯著性差異；
　　3.觀察保存后細胞存活率與反應其功能狀態(tài)指標CFE之間的關聯程度，采用臺盼藍染色法測得的活細胞比例與CFE的相關性為r2=0.893，而其它的檢測方法

6、（AnnexinV-PI、TUNEL、CCK-8、Live-DeadAssay、貼壁實驗）測得的活細胞比例與CFE則具有較好的的相關性（分別為r2=0.935、0.949、0.924、0.947、0.982），其中貼壁實驗的相關系數最高；
　　4.貼壁實驗作為一種人工活性檢測方法，其結果的可靠性存在爭議。采用其進行活力分析時，5個觀察者測得的活性數據不存在顯著性差異，具有較好的一致性。
　　結論：
　　1.采用幾種經典